[發(fā)明專利]一種雞骨常山種苗的組培快繁和離體保存方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011172234.6
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112119915B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李春芳;何俊;楊俊波
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01N3/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發(fā)明提供了一種雞骨常山種苗的組培快繁和離體保存方法，涉及種質(zhì)保存技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以雞骨常山的帶芽莖段為對象，通過外植體消毒，初代培養(yǎng)獲得不定芽，并對其進(jìn)行增殖誘導(dǎo)、生根和離體保存等，建立了雞骨常山的組培快繁和離體保存體系，月增殖系數(shù)達(dá)1：4，離體保存繼代周期達(dá)1年左右。利用本發(fā)明所述組培快繁和離體保存方法，延長離體保存的時間，可以降低組培苗轉(zhuǎn)接工作量，也避免了連續(xù)多次繼代引起遺傳性改變的可能，為種質(zhì)保存和可持續(xù)利用提供了保證。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于種質(zhì)保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雞骨常山種苗的組培快繁和離體保存方法。

背景技術(shù)

雞骨常山(Alstonia yunnanensis)為夾竹桃科雞骨常山屬植物，是我國的特有物種，分布在我國西南地區(qū)海拔1100～2400米的山坡或溝谷地帶。其根和葉均作藥用，根中所含的單萜吲哚生物堿具有降低血壓作用，是開發(fā)天然降血壓藥物的重要野生植物種質(zhì)資源；雞骨常山花期較長，花紫紅色有香氣，高腳碟狀的花朵多朵簇生于枝頂，極具觀賞價值；植株株型為高在2米左右的直立灌木，并具多分枝，且分枝耐修剪，很適合叢植籬植美化環(huán)境，具有重要的園林綠化應(yīng)用價值。目前，雞骨常山多采用種子播種、分株或扦插繁殖，繁殖效率低，無法滿足規(guī)模化種苗生產(chǎn)的要求。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種雞骨常山種苗的組培快繁和離體保存方法，有效地解決雞骨常山的組培快繁問題，大大延長離體保存周期，有利于雞骨常山種質(zhì)資源的保存和開發(fā)利用，為今后的資源挖掘奠定基礎(chǔ)。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種雞骨常山種苗的組培快繁和離體保存方法，包括以下步驟：(1)將消毒后的幼嫩側(cè)芽莖段為外植體，將所述外植體轉(zhuǎn)移至初代培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)，得無菌新芽；所述初代培養(yǎng)及以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括6-BA 0.5mg/L、NAA 0.2mg/L、蔗糖20g/L和瓊脂5.6g/L，pH值為5.8；

(2)將所述無菌新芽轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，得叢生芽；所述增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括6-BA 0.3～1.0mg/L、IAA 0.2mg/L、蔗糖20g/L和瓊脂5.6g/L，pH值為5.8；

(3)將所述叢生芽切割成單芽后接種于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，得生根組培苗；所述生根培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括IAA 0.1～1.0mg/L、蔗糖20g/L和瓊脂5.6g/L，pH值為5.8；

(4)將所述生根組培苗轉(zhuǎn)移至離體保存培養(yǎng)基上進(jìn)行離體保存；所述離體保存培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括IAA 1.0mg/L、蔗糖20g/L和瓊脂5.6g/L，pH值為5.8。

優(yōu)選的，步驟(1)所述消毒包括：將幼嫩的側(cè)芽莖段浸泡在肥皂水中，經(jīng)自來水沖洗1h后，于無菌環(huán)境中剪成帶單個芽的莖段，用體積百分含量為75％的酒精消毒10s，無菌水沖洗3遍，用質(zhì)量百分含量為0.1％的升汞溶液進(jìn)行表面消毒6～8min，無菌水清洗3～5次。

優(yōu)選的，步驟(3)得到生根組培苗后，待所述生根組培苗生根2～4條、根長2～3cm時進(jìn)行移栽。

優(yōu)選的，所述移栽前還包括煉苗。

優(yōu)選的，所述移栽的移栽基質(zhì)為包括腐葉土和生紅土的混合基質(zhì)，所述腐葉土和生紅土的體積比為1:1。

優(yōu)選的，步驟(1)所述初代培養(yǎng)、步驟(2)所述繼續(xù)培養(yǎng)、步驟(3)所述生根培養(yǎng)和步驟(4)所述離體保存的溫度均為25±3℃，光照強度均為20～40μmol/(m²·s)，光照時間均為12h/d。