[發明專利]一種從湘西酸肉中分離篩選芽孢桿菌的方法

在審

• 申請號: 202011171990.7
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112111436A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 瞿朝霞;魏冕;曾靜朗;李裕;周錦悅;于杜;劉鑫怡
• 申請（專利權）人: 懷化學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12R1/07
• 代理公司: 深圳市興科達知識產權代理有限公司 44260
• 代理人: 殷瑜

1.一種從湘西酸肉中分離篩選芽孢桿菌的方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一：原料處理：在裝有90mL無菌水的三角瓶內加入10g剪碎后的湘西酸肉，之后做10倍系列稀釋，每個稀釋度取0.1mL加到牛肉膏培養基上，適當溫度下培養48h得到菌株；

步驟二：菌株的分離純化：對步驟一得到的菌株進行革蘭氏鏡檢，觀察菌株形態，挑選出典型菌株，并經過平板反復劃線或的菌落，經過分離純化后得到純的目的菌株；

步驟三：菌株的初步篩選：將步驟二中得到的純的目的菌株接種于牛肉膏培養基中，放入恒溫培養箱中培養18h，取10％體積分數的新鮮菌液接種于含有一定濃度的牛肉膏培養基中，并加入2ml對氨基苯磺酸溶液混勻，避光靜置5min，加入1ml鹽酸萘乙二胺溶液混勻，光靜置15min，挑選顏色較淺的菌株；

步驟四：菌株復篩：將步驟三中得到的菌株進行菌株活化后，在含有適量濃度NaNO2的牛肉膏蛋白胨液體培養基中接種5％體積分數的芽孢桿菌，適當的培養溫度下發酵48h，測定培養前后發酵液中NaNO2的含量，計算出芽孢桿菌對亞硝酸鹽的降解率，挑選對高亞硝酸鹽降解和耐受能力較強的菌株。

2.根據權利要求1所述的一種從湘西酸肉中分離篩選芽孢桿菌的方法，其特征在于：步驟四中采用鹽酸萘乙二胺分光光度法去測定亞硝酸鹽NaNO2含量。

3.根據權利要求1所述的一種從湘西酸肉中分離篩選芽孢桿菌的方法，其特征在于：所述的步驟一中的湘西酸肉是指選用的肥豬肉，把豬肉焯水之后切成大塊的長條形狀，放適量的鹽和花椒粉腌制五個小時左右，再裹上一層玉米粉攪拌均勻，放入特制的壇子中密封至少半個月以上的酸肉。

4.根據權利要求1-3任一項所述的一種從湘西酸肉中分離篩選芽孢桿菌的方法，其特征在于：通過上述方法分離篩選出的芽孢桿菌菌株在pH 7.0、培養溫度37℃、亞硝酸鹽濃度175mg/L的菌液中恒溫培養48h，菌株對亞硝酸鹽的降解率達到最高。