[發明專利]啟動子pNtab3450及其表達載體和應用有效
| 申請號： | 202011171416.1 | 申請日： | 2020-10-28 |
| 公開（公告）號： | CN112280779B | 公開（公告）日： | 2022-03-04 |
| 發明（設計）人： | 丁安明;陳志華;楊興有;余祥文;王衛鋒;孫玉合 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院煙草研究所;中國煙草總公司四川省公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/82 |
| 代理公司： | 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256 | 代理人： | 張潔 |
| 地址： | 266100 山東省青島市嶗山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 啟動子 pntab3450 及其 表達 載體 應用 | ||
1.啟動子pNtab3450，其特征在于，所述啟動子pNtab3450由1500個核苷酸組成，其序列為SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的啟動子pNtab3450，其特征在于，所述啟動子pNtab3450誘導干旱、高鹽或ABA。
3.一種表達載體，其特征在于，它是在植物表達載體中插入了如權利要求1所述的如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
4.根據權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述的植物表達載體為pBI101。
5.權利要求1所述的啟動子pNtab3450在以干旱、高鹽或ABA為選擇壓力的選擇標記方面的應用。
6.權利要求1所述的啟動子pNtab3450在培育抗干旱、耐高鹽或耐ABA的轉基因植物的應用，其特征在于，所述的植物為煙草。
7.一種提取、擴增權利要求1所述的啟動子pNtab3450的PCR方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)提取煙草品種的基因組DNA；
2)以煙草品種的基因組DNA為模板，使用引物，利用高保真酶FastPfu FlyDNA，擴增啟動子pNtab3450；
其中：PCR反應體系為：模板基因組DNA2μL，正向引物1μL,反向引物1μL,5×Fly buffer10μL,dNTP mix 10μL,Pfu Fly 2μL,ddH2O 24μL,總體積50μL。
8.根據權利要求7所述的PCR方法，其特征在于，擴增程序為：95℃ 3min；95℃ 15s，55℃ 15s，72℃ 2min，35個PCR循環，72℃ 10min。
9.根據權利要求7所述的PCR方法，其特征在于，所述引物對為：
正向引物：5’-TCTAGACATTTCTGTGATTTGTTT-3’；
反向引物：5’-TCTAGATTTGTTACTTATTGATTGTA-3’。
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