[發(fā)明專利]一種吲哚布芬原料藥中基因毒性雜質(zhì)的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011171014.1
• 申請(qǐng)日: 2020-10-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114487141A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張霞;王新月;張璇;張志明;胡方劍;倪振華;謝小燕;陳磊;獨(dú)文娜;譚芳;趙澄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州中美華東制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種吲哚布芬原料藥中基因毒性雜質(zhì)的檢測(cè)方法。所述方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠或辛烷基鍵合硅膠為固定相對(duì)基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行色譜分離，采用質(zhì)譜檢測(cè)儀進(jìn)行分析檢測(cè)，既可以單獨(dú)檢測(cè)也可以同時(shí)檢測(cè)基因毒性雜質(zhì)2?(4?氨基)苯基丁酸和/或2?(4?硝基)苯基丁酸，能夠?qū)崿F(xiàn)基因毒性雜質(zhì)2?(4?氨基)苯基丁酸和/或2?(4?硝基)苯基丁酸的單獨(dú)或者同時(shí)有效分離，還能夠準(zhǔn)確測(cè)定基因毒性雜質(zhì)的含量，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，對(duì)于實(shí)現(xiàn)對(duì)吲哚布芬原料藥的質(zhì)量控制、安全性保證具有極其重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及吲哚布芬原料藥中兩種基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸測(cè)定的檢測(cè)方法，用于吲哚布芬原料藥中基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸的分析與限度測(cè)定。

背景技術(shù)

吲哚布芬(Indobufen)是一種異吲哚啉基苯基丁酸衍生物，一種血小板聚集的抑制劑，于1984年在意大利首批上市。

其化學(xué)名為(±)2-[4-(1-氧代-2-異二氫吲哚基)苯基]丁酸，分子式C₁₈H₁₇NO₃，精確分子量295.12，結(jié)構(gòu)式如下所示：

吲哚布芬主要是通過(guò)以下機(jī)制發(fā)揮抗血小板聚集作用：(1)可逆性抑制血小板環(huán)氧化酶，使血栓素B2(血小板聚集的強(qiáng)效激活劑)生成減少；(2)抑制二磷酸腺苷(ADP)、腎上腺素和血小板活化因子(PAF)、膠原和花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集；(3)降低血小板三磷酸腺苷、血清素、血小板因子3、血小板因子4和β-凝血球蛋白的水平，降低血小板粘附性。吲哚布芬是一種可逆的多靶點(diǎn)抗血栓藥物。對(duì)于激活劑誘發(fā)的血小板聚集，單次口服吲哚布芬200mg后2小時(shí)可達(dá)最大抑制作用，12小時(shí)后仍有顯著抑制作用(90％)，24小時(shí)內(nèi)恢復(fù)。

對(duì)于報(bào)道的吲哚布芬的合成工藝中多數(shù)工藝路線涉及2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸，專利CN106631974B公開(kāi)了如下的合成工藝路線：

(1)氫化反應(yīng)

(2)環(huán)化反應(yīng)：

(3)鋅粉還原反應(yīng)

該工藝路線以2-(4-硝基)苯基丁酸為起始物料，得到關(guān)鍵中間體，而2-(4-氨基苯基)丁酸和2-(4-硝基苯基)丁酸含有基因毒性的警示官能團(tuán)，屬于基因毒性雜質(zhì)，并有在成品中殘留的風(fēng)險(xiǎn)。依據(jù)ICHM7指導(dǎo)原則的相關(guān)規(guī)定并結(jié)合吲哚布芬制劑的每日最大服用劑量(其中吲哚布芬400mg)，2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的每日最大攝入量不得大于1.5μg，故吲哚布芬原料藥中2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的控制限度不得超過(guò)3.75ppm。但因其限度較低，檢測(cè)較為困難，目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)告基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的檢測(cè)方法。

因此，找到一種靈敏度高，專屬性好的檢測(cè)基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基)苯基丁酸和/或2-(4-硝基)苯基丁酸的方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)吲哚布芬中該雜質(zhì)的控制，對(duì)提高產(chǎn)品的質(zhì)量和用藥的安全性具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供了基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的測(cè)定方法，能夠有效實(shí)現(xiàn)吲哚布芬原料藥中基因毒性雜質(zhì)2-(4-氨基)苯基丁酸和2-(4-硝基)苯基丁酸的測(cè)定和限度控制。所述的檢測(cè)方法的靈敏度高、專屬性強(qiáng)且操作簡(jiǎn)便、快速。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：