[發明專利]用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法和應用

在審

• 申請號: 202011170419.3
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112305219A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 梁曉;張啟迪;李金燕;于萬鵬;王婉瑜
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 劉楊

1.一種用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，將待測樣品與熒光標記物溶液及尼卡巴嗪單克隆抗體溶液混合，孵育進行競爭反應，測定所得體系的熒光偏振值，根據熒光偏振值-尼卡巴嗪標準樣品中尼卡巴嗪濃度標準曲線，計算所述待測樣品中尼卡巴嗪的濃度；包括以下步驟：

S1、將一系列已知濃度的尼卡巴嗪標準品的溶液分別與熒光標記物溶液以及尼卡巴嗪單克隆抗體溶液混合，孵育進行競爭反應，測定所得體系的熒光偏振值；

S2、以測定的熒光偏振值為縱坐標，所述一系列已知濃度的尼卡巴嗪標準品濃度的對數值為橫坐標，繪制標準曲線；

S3、將待測樣品代替步驟S1中的尼卡巴嗪標準品，將所述待測樣品與所述熒光標記物溶液以及所述尼卡巴嗪單克隆抗體溶液等體積混合，孵育進行競爭反應，測定所得體系的熒光偏振值；

S4、根據步驟S2中的標準曲線，計算出所述待測樣品中尼卡巴嗪的濃度。

2.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述熒光標記物為尼卡巴嗪半抗原與異硫氰酸熒光素的酰胺偶聯物。

3.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述一系列已知濃度的尼卡巴嗪標準品的溶液為尼卡巴嗪標準品溶于硼酸鹽緩沖液配制而成；所述一系列已知濃度為3000ng/mL、1000ng/mL、333.33ng/mL、111.11ng/mL、37.03ng/mL、12.34ng/mL、4.11ng/mL、1.37ng/mL八個濃度梯度。

4.如權利要求3所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述硼酸鹽緩沖液為摩爾濃度0.05M、pH值為8、且含0.05MNaCl、20％甲醇的硼酸鹽緩沖液。

5.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述熒光標記物溶液的濃度為工作濃度，所述熒光標記物的工作濃度為標記物的熒光值是背景值10倍時對應的濃度10nM；所述尼卡巴嗪單克隆抗體溶液的濃度為工作濃度，工作濃度為與熒光標記物50％的抗體結合時的抗體稀釋倍數作為抗體的工作濃度，為1/200。

6.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述孵育競爭反應的溫度為20～25℃，時間為5～20min；所述熒光偏振值的測定條件為：激發波長485nm，發射波長530nm，515nm濾光片。

7.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述標準曲線的繪制利用Origin 8.5軟件，以四參數方程模型擬合曲線。

8.如權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法，其特征是，所述待測樣品為雞肉；所述雞肉樣品處理方法：雞肉樣品勻漿后加入甲醇，渦動、離心，取上清用硼酸鹽緩沖液稀釋5倍。

9.權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法在雞肉尼卡巴嗪含量檢測中的應用。

10.權利要求1所述的用于檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫分析方法在制備檢測尼卡巴嗪的熒光偏振免疫試劑盒中的應用。