[發明專利]一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒

在審

• 申請號: 202011169910.4
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112094906A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 陳鴻;姜春巖;史荔;趙文川;劉舒媛;羅廷虎;張啟;楊智敏;郭艷
• 申請（專利權）人: 陳鴻
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都明濤智創專利代理有限公司 51289
• 代理人: 杜夢

本發明公開了一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒，包括PCR反應體系，所述PCR反應體系包含第一引物組和/或第二引物組，所述第一引物組包含如下引物序列：上游引物：5’?ACGTCACTAAAATAAAATCCTGTCTA?3’，下游引物：5’?GAAGCTCCAAGAAACCATCC?3’；所述第二引物組包含如下引物序列：上游引物COL12?F1 5’?GAG AAT CCA GAA CAG CTC CAC CAG?3’，下游引物COL12?R1 5’?CAT GGC TAG TAT GGG ACA G?3’。本發明提供的適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒可對中國地區前交叉韌帶身上人群進行基因診斷，對于進行ACL患者的診斷、預后和治療具有重大意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是涉及一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒。

背景技術

前交叉韌帶(anterior cruciate ligament，ACL)是人體膝關節中重要的靜力性穩定結構，ACL損傷在膝關節的損傷中較為常見，是引起膝關節功能障礙的常見因素之一。有研究表明內部因素和外部因素共同作用導致前交叉韌帶的損傷，ACL損傷中大部分都是由于參加體育活動這種外部因素所致，但是通過對ACL損傷人群進行研究，可以發現，有ACL損傷家族史與沒有ACL損傷家族史的人群相比，ACL損傷的發生率明顯增加。明確ACL損傷的原因將有助于預防膝關節損傷，但目前ACL損傷發生的病因尚不清楚，因此，尋找與ACL相關的基因位點，探討ACL的遺傳機制，為ACL患者的診斷、預后和治療提供遺傳學依據顯得尤為重要。本研究針對ACL相關的基因位點與中國地區ACL損傷的生物學相關性進行了系列實驗研究，以提供一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒，對中國地區前交叉韌帶損傷人群進行基因診斷。

本發明為了實現上述目的具體采用以下技術方案：

一種適用于中國地區前交叉韌帶損傷的基因診斷試劑盒，包括PCR反應體系，所述PCR反應體系包含第一引物組和/或第二引物組，所述第一引物組包含如下引物序列：

上游引物：5’-ACGTCACTAAAATAAAATCCTGTCTA-3’；

下游引物：5’-GAAGCTCCAAGAAACCATCC-3’；

所述第二引物組包含如下引物序列：

上游引物COL12-F1 5’-GAG AAT CCA GAA CAG CTC CAC CAG-3’；

下游引物COL12-R1 5’-CAT GGC TAG TAT GGG ACA G-3’；

更進一步地，所述第二引物組還包含以下引物序列中的一種或多：

上游引物COL12-F2 5’-ACT TTT GCG TGG GTA TGT-3’；

下游引物COL12-R2 5'-CTC CAA AAC AAG TAG TAG C-3’。

更進一步地，所述PCR反應體系還包括10×PCR擴增緩沖液、dNTP、HostStart rTaq聚合酶、模板DNA。

更進一步地，所述試劑盒每一人份包括PCR反應體系20μL，其中，PCR反應體系包括10×PCR擴增緩沖液2.0μL、dNTP1.6μL、上游引物0.2μL、下游引物0.2μL、HostStart rTaq聚合酶0.1μL、模板DNA1.3μL，剩余由無菌雙蒸水擴充至20μL；

PCR擴增反應的條件為：94℃預變形3min，94℃變性30s，58.9℃退火30s，72℃延伸2min，共30個循環，隨后72℃延10min，最后4℃保存。