[發明專利]一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法

在審

• 申請號: 202011169719.X
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112375153A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 梁志勇;丁洪雪;楊慶利;宋江紅
• 申請（專利權）人: 梁志勇
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C12P19/04;C12P19/14;A23K20/163;A23L33/125
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 賈楠楠

1.一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于包括人參花預處理、多級逆流-酶解耦合提取、純化、噴霧干燥四個步驟，所述的具體步驟如下：

1）預處理：將含水量30-50%的新鮮人參花（如含水量過低，可加入適量純凈水）打漿至呈糊狀，投入多級逆流罐組中進行多級逆流-酶解耦合提取；或者將干人參花粉碎至20目以下，加入6-10倍重量的純凈水，投入多級逆流罐組中進行多級逆流-酶解耦合提取；

2）多級逆流-酶解耦合提取：設置3-5個浸泡提取罐連續逆流操作，在提取過程中，通過對提取水溶液的逆向轉移實現提取相和提余相的逆向操作，將溶出的多糖及時移出，使各罐組之間形成多糖濃度梯度，逆向提取過程中保持罐內溫度40-60℃，pH 6.0-8.0，反應0.5-2h，添加纖維素酶、半纖維素酶、木質素酶、蛋白酶、淀粉酶中的一種或多種的組合，通過酶解提高多糖溶出率，最終提取液由第一級即投料罐中排出，提余相即提取后的殘渣從最后一級即提取水的加入罐中排出，得到酶解提取液；

3）純化：將酶解提取液過濾或離心，將得到的濾液或離心液通過截留分子量為2000-3500Da的超濾膜，并達到脫鹽、脫蛋白的目的，得到超濾濃縮液；

4）干燥：超濾濃縮液進一步濃縮至固形物達到25-35%，噴霧干燥，即可得到人參花寡糖。

2.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述步驟2）中纖維素酶、半纖維素酶、木質素酶的加入量為每公斤干人參花500個酶活力單位，所述纖維素酶、半纖維素酶、木質素酶的最佳酶解條件為：提取罐內pH為6.0，酶解溫度為50℃，保溫時間為1小時。

3.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述步驟2）中淀粉酶的加入量為每公斤干人參花450個酶活力單位，所述淀粉酶的最佳酶解條件為：提取罐內pH為7.0，酶解溫度為55℃，保溫時間為2小時。

4.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述所述步驟2）中蛋白酶的加入量為每公斤干人參花200個酶活力單位，所述蛋白酶的最佳酶解條件為：提取罐內pH為8.0，酶解溫度為45℃，保溫時間為1小時。

5.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述步驟3）中的過濾操作中濾布的目數為600-1000目；所述步驟3）中的離心操作中離心轉速為3500轉/分，離心時間為10min。

6.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述步驟2）中添加一定量的柚苷酶，加入量為每公斤干人參花200個酶活力單位。

7.根據權利要求1所述一種利用多級逆流-酶解耦合技術提取人參花多糖的方法，其特征在于所述方法的具體步驟如下：

1）預處理：將干人參花粉碎后過20目篩，投入多級逆流浸泡罐，加入6倍重量的水，進行多級逆流-酶解耦合提取；

2）多級逆流-酶解耦合提取：設置3級逆流提取罐連續逆流操作，一級罐保持溫度40℃，二級罐溫度50℃，三級罐溫度60℃，調節各罐pH為7.0，按每公斤干人參花200-500個酶活力單位加入纖維素酶、半纖維素酶、木質素酶、淀粉酶、蛋白酶、柚苷酶，逆流提取1小時，升溫至90℃以上，保溫15分鐘，滅酶活，最終提取液由第一級即投料罐中排出，殘渣從三級罐即提取水的加入罐中排出，得到人參花多糖粗提液；

3）純化：將粗提液過濾或離心，將得到的濾液或離心液通過截留分子量為2500Da的超濾膜，達到脫鹽、脫蛋白及其它雜質的目的，得到超濾濃縮液；

4）干燥：超濃縮液進一步濃縮至固形物達到30%，噴霧干燥，即可得到人參花多糖。

8.一種按照權利要求1-7任一所述的方法制備得到的人參花多糖。

9.權利要求8所述的人參花多糖在制備保健食品、食品添加劑、飼料添加劑和功能型農業制品中的應用。