[發(fā)明專利]一種基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅的分子鑒別方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011167259.7 | 申請日： | 2020-10-28 |
| 公開（公告）號： | CN112159851A | 公開（公告）日： | 2021-01-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鐘立強;王明華;陳校輝;李大命;唐晟凱;劉燕山 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇省淡水水產(chǎn)研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京瑞弘專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32249 | 代理人： | 徐激波 |
| 地址： | 210007 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 coi 基因 序列 多鱗四指馬鲅 四指馬鲅 分子 鑒別方法 | ||
1.一種基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅的分子鑒別方法，其特征在于：包含以下步驟，
(1)分別提取待鑒定的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅基因組DNA；
(2)以提取的基因組DNA為模板，PCR擴增多鱗四指馬鲅和四指馬鲅的細胞色素氧化酶亞基I基因，PCR擴增使用的上游引物如序列SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3，下游引物如序列SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4；
(3)擴增產(chǎn)物純化后，直接測序，進行多鱗四指馬鲅和四指馬鲅擴增產(chǎn)物序列比對，序列的第356-357位點堿基為AA的是多鱗四指馬鲅，序列的第356-357位點堿基為GG的則是四指馬鲅。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅的分子鑒別方法，其特征在于：所述的PCR反應(yīng)體系為50μL：50ng/μL的模板DNA 1μL，PCR緩沖液5μL，dNTP混合液4μL，每種dNTP 0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2IU的Taq酶；雙蒸水36μL；所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl2，0.01％明膠組成；PCR擴增反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性2min，94℃變性45s，60℃退火1min，72℃延伸1min，經(jīng)35個循環(huán)后再72℃延伸10min。
3.一種基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅分子鑒別的引物對，其特征在于：包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列為SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3，所述下游引物的序列為SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4。
4.權(quán)利要求3所述的引物對在制備多鱗四指馬鲅和四指馬鲅分子鑒別試劑中的應(yīng)用。
5.一種基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅分子鑒別試劑，其特征在于：包含上游引物和下游引物，所述上游引物的序列為SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3，所述下游引物的序列為SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于COI基因序列的多鱗四指馬鲅和四指馬鲅分子鑒別試劑，其特征在于：還包括PCR緩沖液和dNTP混合液，所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl2，0.01％明膠組成。
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