[發(fā)明專利]華佗再造丸HPLC特征圖譜及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011165830.1
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112326822B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張春波;蘇碧茹;伏寶香;彭中芳;屠鵬飛;王亞玲;姜勇;趙明波;鍶景希
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 向薇

1.一種華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟a、取槲皮素對照品，用50％v/v～100％v/v甲醇水溶液制成每mL含槲皮素對照品100μg的溶液，作為對照品溶液；

步驟b、取華佗再造丸粉末，用50％v/v～100％v/v甲醇水溶液配成所述華佗再造丸粉末濃度為62.5～250mg/mL的溶液，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；

步驟c、用高效液相色譜法測定所述對照品溶液和所述供試品溶液，色譜條件為：采用C18色譜柱，流動相采用A相與B相的混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長為254nm，柱溫為25℃～35℃，流速為0.9～1.1mL/min，進(jìn)樣量為5～20μL，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算≥20000，其中，所述A相為乙腈，所述B相為0.1wt％～0.3wt％乙酸水溶液；

所述步驟c中所述梯度洗脫的時間及流動相體積比例為：

0～45min，A相：5％～19％、B相：95％～81％；

45～140min，A相：19％～78％、B相：81％～22％；

所述HPLC特征圖譜包括12個特征峰，以7號峰槲皮素峰為參照峰，各特征峰的相對保留時間為：

1號峰：相對保留時間為0.108±0.0054；

2號峰：相對保留時間為0.183±0.0091；

3號峰：相對保留時間為0.289±0.0144；

4號峰：相對保留時間為0.525±0.0262；

5號峰：相對保留時間為0.543±0.0271；

6號峰：相對保留時間為0.711±0.0355；

7號峰：相對保留時間為1.000±0.0500；

8號峰：相對保留時間為1.088±0.0544；

9號峰：相對保留時間為1.128±0.0564；

10號峰：相對保留時間為1.294±0.0647；

11號峰：相對保留時間為1.343±0.0671；

12號峰：相對保留時間為1.635±0.0817。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟c中所述C18色譜柱的內(nèi)徑為4.6mm，柱長為250mm，填料粒度為5μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟c中所述柱溫為30℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟c中所述流速為1.0mL/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟c中所述進(jìn)樣量為20μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟b中所述華佗再造丸粉末溶液的濃度為250mg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述B相為0.2wt％乙酸水溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的華佗再造丸HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟b中所述甲醇水溶液的濃度為100％v/v。

9.權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的華佗再造丸HPLC特征圖譜在華佗再造丸檢測中的應(yīng)用。