[發(fā)明專利]生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011161584.2
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112326821B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曲林林;楊振全
• 申請（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南昌逸辰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36145
• 代理人: 劉林艷

本發(fā)明提供了一種生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法。本發(fā)明通過向生物肝臟組織中加入第一混合溶劑，經(jīng)勻漿、離心后，得到第一萃取液；再向第一萃取液中加入第二混合溶劑，并加入醋酸水溶液，經(jīng)二次萃取得到第二萃取液；然后將負載有銀離子的硅膠作為填料，利用含有該填料的固相萃取柱對第二萃取液進行固相萃取，得到脂質(zhì)提取液，并采用色譜?質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對其進行檢測，得到生物肝臟組織中各類脂質(zhì)的含量。通過上述方式，本發(fā)明能夠通過兩步液相萃取充分提取生物肝臟組織中含有的各類脂質(zhì)，并通過制備負載有銀離子的硅膠對萃取液進行固相萃取，實現(xiàn)對脂質(zhì)的有效富集，從而有效提高脂質(zhì)含量檢測的靈敏度和準確性，具有較好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及脂質(zhì)含量檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法。

背景技術(shù)

脂質(zhì)通常被定義為自然界中存在的一類難溶于水、易溶于有機溶劑的小分子化合物，是生物體內(nèi)非常重要的物質(zhì)。作為構(gòu)成生物膜的主要成分，脂質(zhì)具有分子多樣性和多種生物功能，包括為蛋白質(zhì)相互作用提供合適的環(huán)境、儲存能量、作為重要的信使分子等。在生物體的各個器官中，肝臟在脂質(zhì)的消化、吸收、合成、分解與運輸過程中均具有重要作用，對生物肝臟組織中的脂質(zhì)含量進行準確有效的檢測對于肝臟酯類代謝組學(xué)的研究具有重要的意義。

目前，對肝臟組織中脂質(zhì)含量的檢測主要包括脂質(zhì)的提取和檢測兩個步驟。其中，對脂質(zhì)的提取是脂質(zhì)檢測過程的重要工序，其目的在于去除復(fù)雜生物樣品中可能對脂質(zhì)檢測造成干擾的蛋白質(zhì)、糖等物質(zhì)，以保證檢測結(jié)果的準確性。然而，現(xiàn)有技術(shù)中常用的脂質(zhì)提取方法通常需要使用較多的組織樣本，且提取過程使用的溶劑存在毒性、對組織內(nèi)的脂質(zhì)富集效果不足，不僅影響了提取過程的效率，也影響了檢測結(jié)果的準確性。

公開號為CN109459518A的專利提供了一種生物體肝臟組織中脂質(zhì)的提取和檢測方法。該專利通過采用毒性小的甲基叔丁基醚和甲醇作為提取溶劑對生物體肝臟組織中的脂質(zhì)進行提取，萃取的脂質(zhì)數(shù)量多、涵蓋種類多，達到了操作簡便、快速提取的目的；并采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀對提取的脂質(zhì)進行檢索分析，從而完成對生物體肝臟組織中脂質(zhì)的提取和檢測。然而，在采用該專利提供的方法提取脂質(zhì)時，其上層有機相與下層水相間的界面存在不穩(wěn)定性，容易造成脂質(zhì)提取率不高和可重復(fù)性較差的問題，檢測的靈敏度較低；并且，采用該方法提取到的脂質(zhì)中會含有較多的極性基質(zhì)，對后續(xù)脂質(zhì)含量的檢測過程產(chǎn)生干擾，對肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測結(jié)果不夠準確。

有鑒于此，有必要設(shè)計一種改進的生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法，以解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法。通過對生物肝臟組織進行兩步液相萃取，充分提取其中含有的各類脂質(zhì)，提高生物肝臟組織中脂質(zhì)的提取率，使檢測結(jié)果具有較高的準確度；并通過對液相萃取后的萃取液進行固相萃取，實現(xiàn)對脂質(zhì)的有效富集，提高脂質(zhì)含量檢測的靈敏度。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種生物肝臟組織脂質(zhì)含量的檢測方法，包括如下步驟：

S1、向生物肝臟組織中加入含有異丙醇和乙腈的第一混合溶劑，進行勻漿處理，得到勻漿液；對所述勻漿液進行離心處理，取上層清液作為第一萃取液；

S2、向步驟S1得到的所述第一萃取液中加入含有正己烷和醋酸乙酯的第二混合溶劑，再加入醋酸水溶液，充分渦旋后進行二次萃取，取上層清液作為第二萃取液；

S3、將負載有銀離子的硅膠作為填料，利用含有所述填料的固相萃取柱對步驟S2得到的所述第二萃取液進行固相萃取，得到脂質(zhì)提取液；

S4、采用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對步驟S3得到的所述脂質(zhì)提取液進行檢測，得到生物肝臟組織中各類脂質(zhì)的含量。

作為本發(fā)明的進一步改進，在步驟S3中，所述填料的制備方法包括如下步驟：