[發明專利]生物肝臟組織脂質含量的檢測方法

有效

• 申請號: 202011161584.2
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112326821B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 曲林林;楊振全
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南昌逸辰知識產權代理事務所(普通合伙) 36145
• 代理人: 劉林艷

1.一種生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、向生物肝臟組織中加入異丙醇和乙腈的第一混合溶劑，進行勻漿處理，得到勻漿液；對所述勻漿液進行離心處理，取上層清液作為第一萃取液；

S2、向步驟S1得到的所述第一萃取液中加入正己烷和醋酸乙酯的第二混合溶劑，再加入醋酸水溶液，充分渦旋后進行二次萃取，取上層清液作為第二萃取液；

S3、將負載有銀離子的硅膠作為填料，利用含有所述填料的固相萃取柱對步驟S2得到的所述第二萃取液進行固相萃取，在所述固相萃取過程中以1-己烯作為洗脫液進行洗脫，得到脂質提取液；

S4、采用色譜-質譜聯用技術對步驟S3得到的所述脂質提取液進行檢測，得到生物肝臟組織中各類脂質的含量；

在步驟S3中，所述填料的制備方法包括如下步驟：

S31、將硅膠顆粒加入鹽酸溶液中，在90～100℃下充分混合14～16h后，經過濾、洗滌、干燥后，得到活化的硅膠；

S32、將甲基咪唑和3-氯丙基三乙氧基硅烷加入乙腈溶液中，在100～110℃下反應16～20h后，再加入六氟磷酸鉀，繼續反應24～28h后，過濾并收集濾液；

S33、將步驟S32得到的所述濾液與甲苯混合后，再加入步驟S31得到的所述活化的硅膠，在100～110℃下反應22～26h，并將產物過濾、洗滌、干燥后得到功能化的硅膠；

S34、將步驟S33得到的所述功能化的硅膠加入四氟硼酸銀的丙酮溶液中，在避光條件下充分混合8～10h后，經過濾、洗滌、干燥，得到負載銀離子的硅膠。

2.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S33中，所述濾液與所述活化的硅膠的質量比為(2～3):1。

3.根據權利要求1或2所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S34中，所述四氟硼酸銀的丙酮溶液中的銀離子濃度為0.1～0.5mol/L。

4.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S3中，所述固相萃取過程包括如下步驟：將所述第二萃取液加入含有所述填料的固相萃取柱中，待平衡后再以正己烷為淋洗劑進行淋洗，然后以1-己烯作為洗脫劑進行洗脫，并收集洗脫液，氮吹濃縮后即得到脂質提取液。

5.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S1中，所述第一混合溶劑中異丙醇和乙腈的體積比為1:(2～3)。

6.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S1中，所述生物肝臟組織與所述第一混合溶劑的質量體積比為100mg:(4～6)mL。

7.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S2中，所述第二混合溶劑中正己烷和醋酸乙酯的體積比為(3～4):1。

8.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S2中，所述第二混合溶劑與所述醋酸水溶液的體積比為1:1；所述醋酸水溶液的濃度為1％～2％。

9.根據權利要求1所述的生物肝臟組織脂質含量的檢測方法，其特征在于：在步驟S2中，所述第一萃取液與所述第二混合溶劑的體積比為1:(1～2)。