[發(fā)明專利]一種專一性標(biāo)記脂滴的2,5-（雜）芳基取代咪唑類熒光探針及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011161161.0
• 申請(qǐng)日: 2020-10-27
• 公開（公告）號(hào): CN112321570A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李成明;陳茂;廖延標(biāo)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07D405/04
• 分類號(hào): C07D405/04;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 成都正華專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

本發(fā)明公開了一種專一性標(biāo)記脂滴的2,5?(雜)芳基取代咪唑類熒光探針及其制備方法，屬于熒光探針技術(shù)領(lǐng)域，該專一性標(biāo)記脂滴的2,5?(雜)芳基取代咪唑類熒光探針具有大的斯托克斯位移，不同極性溶劑中的發(fā)射波長(zhǎng)可以達(dá)到670nm，表現(xiàn)出明顯的聚集誘導(dǎo)發(fā)光現(xiàn)象，克服了傳統(tǒng)熒光探針在細(xì)胞內(nèi)因?yàn)榫奂瘜?dǎo)致的熒光淬滅效應(yīng)，且光穩(wěn)定性好，在786?O細(xì)胞中能專一性標(biāo)記脂滴，實(shí)現(xiàn)高對(duì)比度的熒光成像。可有效解決傳統(tǒng)的熒光探針標(biāo)記脂滴時(shí)存在專一性差、光穩(wěn)定性差和熒光成像對(duì)比度低的問(wèn)題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及熒光探針技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種專一性標(biāo)記脂滴的2,5-(雜)芳基取代咪唑類熒光探針及其制備方法。

背景技術(shù)

目前，一系列的熒光探針已經(jīng)被用于各種細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體等，利用熒光成像技術(shù)，直接對(duì)生物樣本進(jìn)行原位的可視化，并提供對(duì)復(fù)雜生物結(jié)構(gòu)和過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)得以實(shí)現(xiàn)。但一方面，具有紅光或近紅外光發(fā)射的熒光探針有待進(jìn)一步地合成和發(fā)展；另一方面，傳統(tǒng)的熒光探針由于分子間的π-π堆積或非輻射躍遷一般表現(xiàn)出聚集誘導(dǎo)淬滅現(xiàn)象，從而導(dǎo)致實(shí)際的成像效果還無(wú)法讓人滿意。

脂滴主要位于脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)和心肌細(xì)胞中，已被證明在許多生物過(guò)程包括脂質(zhì)代謝、膜轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)降解和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中都起著至關(guān)重要的作用。但一方面，細(xì)胞或生物體內(nèi)基本表現(xiàn)為水溶液的環(huán)境以及復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境；另一方面，具有紅光或近紅外光發(fā)射的熒光探針有待進(jìn)一步地合成和發(fā)展，傳統(tǒng)的熒光探針由于分子間的π-π堆積或非輻射躍遷一般表現(xiàn)出聚集誘導(dǎo)淬滅現(xiàn)象，從而導(dǎo)致傳統(tǒng)的熒光探針標(biāo)記脂滴時(shí)存在專一性差、光穩(wěn)定性差和熒光成像的對(duì)比度低的問(wèn)題。因此，提供一種用于專一性脂滴成像的高性能熒光探針也就顯得十分的有意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足或缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種專一性標(biāo)記脂滴的2,5-(雜)芳基取代咪唑類熒光探針及其制備方法，可有效解決傳統(tǒng)的熒光探針標(biāo)記脂滴時(shí)存在專一性差、光穩(wěn)定性差和熒光成像對(duì)比度低的問(wèn)題。

為達(dá)上述目的，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種專一性標(biāo)記脂滴的2,5-(雜)芳基取代咪唑類熒光探針，其結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示：

其中，R¹為甲基、甲氧基或叔丁基，R²為甲基、取代芳基或芐基，X為氧或硫原子。

本發(fā)明提供的專一性標(biāo)記脂滴的2,5-(雜)芳基取代咪唑類熒光探針的制備方法如圖1所示，具體包括以下步驟：

步驟(1)：向干燥的反應(yīng)器中加入5-溴-2-雜芳基取代咪唑類衍生物、取代的三苯胺硼酸、催化劑、添加劑和溶劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在-40～110℃下反應(yīng)0.1～480小時(shí)。冷卻至室溫，加入二氯甲烷，過(guò)濾，減壓移去溶劑，剩余物用硅膠柱層析分離純化，真空干燥，得到2,5-(雜)芳基取代咪唑類前體；

步驟(2)：向干燥的反應(yīng)器中加入步驟(1)所得的2,5-(雜)芳基取代咪唑類前體、丙二腈、添加劑和溶劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下在-40～70℃條件下攪拌0.1～240小時(shí)。冷卻至室溫，加入二氯甲烷萃取，用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓移去溶劑，剩余物用硅膠柱層析分離純化，真空干燥得專一性標(biāo)記脂滴的2,5-(雜)芳基取代咪唑類熒光探針；

其中，步驟(1)中5-溴-2-雜芳基取代咪唑類衍生物的反應(yīng)濃度為0.001～10mol/L，5-溴-2-雜芳基取代咪唑類衍生物、取代的三苯胺硼酸、添加劑和催化劑的摩爾比為1:0.01～50:0.01～10:0.001～100，5-溴-2-雜芳基取代咪唑類衍生物、取代的三苯胺硼酸、添加劑和催化劑的摩爾比優(yōu)選為1:1～2:1～5:0.01～0.05；

步驟(1)中反應(yīng)溫度優(yōu)選為90～110℃，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為20～24小時(shí)；

步驟(2)中反應(yīng)溫度優(yōu)選為60～80℃，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10～14小時(shí)；