[發明專利]一種碳納米免疫標記層析試紙條及動物毛發中抗生素的檢測方法

在審

• 申請號: 202011154614.7
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112305216A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 傅力
• 申請（專利權）人: 杭州電子科技大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/53
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 周希良

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種碳納米免疫標記層析試紙條及動物毛發中抗生素的檢測方法；其中，碳納米免疫標記層析試紙條，包括底襯和沿底襯的長度方向依次設于底襯上的吸水墊、檢測墊、標記物釋放墊和加樣墊，所述檢測墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的控制線和數條檢測線，控制線包被抗體，各檢測線包被不同的抗生素抗原；所述標記物釋放墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的標記膠體碳抗體。本發明可以快速對動物毛發中多種抗生素進行檢測，檢測范圍廣，具有操作簡便、檢測精度高的優點。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種碳納米免疫標記層析試紙條及動物毛發中抗生素的檢測方法。

背景技術

在畜牧養殖中，為有效防止傳染性疾病的發生和擴大，或促進動物生長發育，常采用抗生素作為臨床用藥或食品添加劑日常使用，包括青霉素類、頭孢菌素類、氨基糖甙類、四環素類、氯霉素類等。嚴格控制用量，關注基礎免疫，合理使用抗生素是規范用藥的前提，但是由于部分養殖戶和獸醫臨床藥理知識欠缺，規范用藥觀念淡薄，以及檢測條件不足等原因導致抗生素濫用的問題日益嚴峻。抗生素濫用的表現包括：獸醫臨床治療過程中不根據實際情況隨意加大抗生素使用劑量，不根據藥物理化特性隨意配伍，采用人藥獸用等。長期濫用抗生素，會使細菌耐藥性增強，耐藥菌株增多，并且進一步通過食源途徑威脅人類健康，同時抗生素或其代謝產物會隨動物糞便排出，造成環境污染。細菌耐藥性問題若不引起重視，最終可能會導致抗生素資源枯竭，人畜病菌感染后無藥可醫的局面。臨床常用的抗生素包括β-內酰胺類抗生素，有青霉素類和頭孢菌素類；氨基糖甙類，有鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素等；四環素類，有四環素、土霉素、金霉素及強力霉素等；氯霉素類，有氯霉素、甲砜霉素等；大環內脂類，有紅霉素、白霉素、麥迪霉素、交沙霉素等。

動物性產品中抗生素及其代謝物殘留檢測的體液檢材如唾液、尿液、血液等，因前處理過程簡單，成為抗生素的常規檢驗樣本，但由于動物的代謝機制，導致體液檢測只能反映出被檢測對象短期內抗生素使用情況。毛發作為一種易獲取的生物檢材，抗生素進入動物毛發的機制包括血液中的藥物通過被動擴散進入毛囊細胞，以及汗液或皮脂分泌進入毛干，然后穩定存在于毛發中數月至數年，不易被分解。因此，通過毛發檢測動物體內藥物的含量，可以更好地反映畜牧養殖過程中抗生素實際使用情況。

毛發中抗生素及其代謝產物的濃度較低，對前處理過程以及檢測精度要求較高，因此，本領域亟需開發一種毛發樣品高效快速提取及檢測的方法。

發明內容

基于現有技術中存在的上述缺點和不足，本發明的目的之一是至少解決現有技術中存在的上述問題之一或多個，換言之，本發明的目的之一是提供滿足前述需求之一或多個的一種碳納米免疫標記層析試紙條及動物毛發中抗生素的檢測方法。

為了達到上述發明目的，本發明采用以下技術方案：

一種碳納米免疫標記層析試紙條，包括底襯和沿底襯的長度方向依次設于底襯上的吸水墊、檢測墊、標記物釋放墊和加樣墊，所述檢測墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的控制線和數條檢測線，控制線包被抗體，各檢測線包被不同的抗生素抗原；所述標記物釋放墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的標記膠體碳抗體。

作為優選方案，所述檢測墊的制備工藝，包括：

將抗體和數種抗生素抗原分別使用包被緩沖液稀釋至1-3mg/mL和0.1-2mg/mL，按一定的比例分別作為檢測線和控制線噴到纖維素膜上，每條線之間的間隔不小于3mm，置于封閉液中1-2h，取出干燥得到檢測墊。

作為優選方案，所述標記物釋放墊的制備工藝，包括以下步驟：

(1)納米碳膠體的制備

將納米碳顆粒加入硼酸緩沖液中超聲至完全溶解，采用水稀釋定容，然后加入碳酸鉀低溫保存，得到納米碳膠體；

(2)抗體的制備