[發(fā)明專利]一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條及動(dòng)物毛發(fā)中抗生素的檢測方法

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• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112305216A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅力
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州電子科技大學(xué)
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G01N33/53
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 周希良

1.一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，包括底襯和沿底襯的長度方向依次設(shè)于底襯上的吸水墊、檢測墊、標(biāo)記物釋放墊和加樣墊，所述檢測墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的控制線和數(shù)條檢測線，控制線包被抗體，各檢測線包被不同的抗生素抗原；所述標(biāo)記物釋放墊包括纖維素膜及位于纖維素膜上的標(biāo)記膠體碳抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，所述檢測墊的制備工藝，包括：

將抗體和數(shù)種抗生素抗原分別使用包被緩沖液稀釋至1-3mg/mL和0.1-2mg/mL，按一定的比例分別作為檢測線和控制線噴到纖維素膜上，每條線之間的間隔不小于3mm，置于封閉液中1-2h，取出干燥得到檢測墊。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，所述標(biāo)記物釋放墊的制備工藝，包括以下步驟：

(1)納米碳膠體的制備

將納米碳顆粒加入硼酸緩沖液中超聲至完全溶解，采用水稀釋定容，然后加入碳酸鉀低溫保存，得到納米碳膠體；

(2)抗體的制備

選擇8周齡的雌性BALB/C小鼠，將不同抗生素抗原采用腹腔注射的方式分別在0周、1周、3周的時(shí)間點(diǎn)下注入，注射完成1周后腹腔接種雜交瘤細(xì)胞，2周后抽取小鼠腹水，使用微孔濾膜過濾腹水，然后離心，吸取上清液；向上清液加入乙酸鈉溶液和辛酸，靜置后離心收集上清液，接著加入硫酸銨至飽和，靜置后離心收集沉淀物；將沉淀物于PBS溶液中透析，收集抗體；

(3)標(biāo)記膠體碳抗體的制備

取納米碳膠體加入抗體，混勻后加入聚乙醇和BSA-Tris緩沖溶液，然后離心收集標(biāo)記膠體碳抗體沉淀物，接著采用PBS溶液溶解標(biāo)記膠體碳抗體沉淀物，完全溶解后涂布至纖維素膜上，干燥后得到標(biāo)記物釋放墊。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，所述步驟(1)中，納米碳顆粒與硼酸緩沖液的比例為1-3mg/mL，硼酸緩沖液的pH為8.0；所述步驟(2)中，所述抗體與納米碳膠體的比例為1-2mg/mL，聚乙醇與納米碳膠體的體積比為0.1-0.3：1；所述步驟(3)中，干燥條件為：濕度為35％、溫度為37℃、時(shí)間10-15h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，所述纖維素膜的制備工藝，包括：

將纖維素和AminCl液體混合至纖維素完全溶解，再加入甲殼素，溶解混勻后倒在膜具中冷卻干燥，得到纖維素膜。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，所述抗生素抗原包括β-內(nèi)酰胺類抗生素、氨基糖甙類、四環(huán)素、氯霉素類和大環(huán)內(nèi)脂類抗生素。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條，其特征在于，相鄰墊之間具有重疊部分。

8.一種動(dòng)物毛發(fā)中抗生素的檢測方法，采用如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條進(jìn)行檢測，其特征在于，檢測方法包括以下步驟：

將動(dòng)物毛發(fā)樣品依次進(jìn)行清洗、研磨、萃取及濃縮，得到樣本待檢液；

將各抗生素抗原的標(biāo)準(zhǔn)品分別采用PBS溶液稀釋，作為各組陽性對照品；

將PBS溶液，作為陰性對照品；

分別將碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條放入毛發(fā)樣本待檢液、各組陽性對照品、陰性對照品中反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后取出，對比各碳納米免疫標(biāo)記層析試紙條的控制線與檢測線是否出現(xiàn)條帶，得到檢測結(jié)果。