[發明專利]葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202011152051.8
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN114480606A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 段志峰
• 申請（專利權）人: 廣州源古紀科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6837;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒，其特征在于，引物組；所述引物組為利用生物信息學知識和相關生物信息學軟件，對公開數據庫中所能檢索到的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥致病基因G6PD的c.1376，c.1388位點核酸序列信息，用PrimerExpressSoftware5.0軟件設計PCR引物；所述引物包括擴增引物G6PD-F、G6PD-R和測序引物M13F、M13R，其堿基序列為：

G6PD-F：TGCCAAACGACGGTTAGTGCAGGGGTCGTCCTCTA；

G6PD-R：AAGGTATGACCATGCACCTGCCATAAATATAGGGGAT；

M13F：TGCCAAACGACGGCCAAAGTC；

M13R：AGCTATGACCATGAAC；

采用多重PCR的方法對待檢測樣本進行PCR擴增；

將PCR擴增產物進行擴增子文庫的構建，ISP(IonSphere^TMParticles，Ion微球)模板的制備，在IonTorrentPGM系統上進行測序，并用軟件對相關測序序列進行分析。

2.根據權利要求1所述的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒，其特征在于，還包括基因芯片，其上帶有針對葡萄糖-6-磷酸脫氫酶基因突變位點設計的突變檢測探針和對應的正常對照探針，所述的突變檢測探針序列為5′-TCAGGTCAAGATGTTGAAA-3′；正常對照探針序列為5′-CCGTCGTCCTCTATGTG-3′。

3.根據權利要求2所述的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒，其特征在于，所述探針5′或3′端經過胺基化處理；所述基因芯片的探針是固定在尼龍膜上；所述引物的5′端標記有生物素。

4.根據權利要求3所述的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒，其特征在于，所述基因芯片，其制備方法包括以下步驟：

S1：合成所述突變檢測探針序列和所述正常對照探針序列，5′或3′端經過胺基化；

S2：將上述探針固定在經活化處理好的尼龍膜上；

S3：以步驟S2所得的尼龍膜利用氫氧化鈉停止反應，制得基因芯片。

5.利用本發明的試劑盒進行人G6PD基因檢測的方法包括以下步驟：利用試劑盒中含特定序列的引物PCR擴增人基因組的DNA；對擴增后的DNA進行雜交；檢測基因芯片表面上結合的DNA。

6.如權利要求1～3任一項所述的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，還包括檢測體系PCR擴增反應液、測序體系反應液。

7.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液還包括2×PCRBuffer、dNTPs和KODFXDNA聚合酶；所述測序體系反應液還包括EDTA、無水乙醇、75％乙醇、HIDI和BigdyeTerminatorV3.1；所述測序體系反應液還包括測序純化液，所述測序純化液包括核酸外切酶I和牛小腸堿性磷酸酶；所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品。