[發明專利]測定人血漿中托法替布濃度的方法

在審

• 申請號: 202011151408.0
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112461946A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 黎明;熊婉瑩;尹小麗
• 申請（專利權）人: 湖南泰新醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于醫藥檢測技術領域，具體公開了一種測定人血漿中托法替布濃度的方法，通過LC?MS/MS系統對血漿中托法替布的濃度進行鑒定分析，采用氘代托法替布作為內標，采用Waters Xselectable HSS T3柱洗脫，ESI串聯質譜檢測，使得本發明方法的提取回收率為101.9％，基質效應、高血脂基質效應和溶血基質效應均無干擾，準確度和精密度高，用量小，可用于臨床大批量樣品分析需求。

技術領域

本發明涉及醫藥檢測技術領域，具體涉及一種測定人血漿中托法替布濃度的方法。

背景技術

枸櫞酸托法替布片(Tofacitinib Citrate Tablets)，主要成分為托法替布，其化學名為：(3R,4R)-4-甲基-3-(甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)-β-氧代-1-哌啶丙腈。枸櫞酸托法替布片(Tofacitinib Citrate Tablets)是輝瑞公司開發的一種JAK(Janus-activated kinase)抑制劑，可有效抑制JAK1和JAK3的活性，阻斷多種炎性細胞因子的信號轉導。枸櫞酸托法替布片作為最新的靶向合成型DMARDs口服片劑，于2012年11月06日經美國FDA批準上市，商品名該藥用于對甲氨蝶呤治療反應不足或不耐受的中度至重度活動性類風濕性關節炎成人患者的治療。目前，已獲全球80多個國家批準上市，于2017年03月10日獲NMPA批準上市許可。既有研究表明托法替布對類風濕關節炎、潰瘍性結腸炎、銀屑病等多種炎癥相關疾病有良好的治療效應。

中國專利CN201410783309.2公開了一種枸櫞酸托法替布的含量測定及有關物質檢測方法，該方法主要采用高效液相色譜法對枸櫞酸托法替布原料藥的含量，以及其有關物質進行了測定和檢查。但該方法，檢測下限不能滿足較小給藥量時生物體內的含量測定，具有一定的局限性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種測定人血漿中托法替布濃度的方法，采用LC-MS/MS法測定人血漿中托法替布濃度，樣本預處理過程簡化，避免基質效應，色譜峰形極佳，實現了對血漿中藥物快速、靈敏、特異性分析，為體內藥代動力學的檢測提供了簡便的分析方法，實現在血漿中較低濃度水平的精準定量。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一方面，本發明提供一種測定人血漿中托法替布濃度的方法，包括如下步驟：

1)樣品制備：取待測血漿樣本，加入內標工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液；

2)液相色譜-質譜聯用檢測：

色譜條件如下：色譜柱：Waters Xselectable HSS T3；流動相：流動相A：0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈；洗脫方式：梯度洗脫；流速：0.400～0.600mL/min；

質譜條件如下：采用ESI源，正離子MRM模式檢測；

3)標準曲線制備：取托法替布標準工作溶液，稀釋到空白血漿中，配制托法替布標準曲線血漿樣品；取標準曲線血漿樣品，加入內標工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液進樣LC-MS/MS系統，記錄每個濃度的托法替布對應的峰面積，以托法替布和內標的峰面積比值為縱坐標，以托法替布濃度為橫坐標，制備標準曲線回歸方程；

4)待測物托法替布測定：將待測血漿按步驟1)制備樣品，按步驟2)采用LC-MS/MS方法檢測，記錄待測物托法替布對應的峰面積，將待測物托法替布的色譜峰面積與內標峰面積的比值代入獲得的標準曲線回歸方程，計算測定的待測物托法替布的相應濃度。

進一步地，所述內標工作溶液中的內標為托法替布-d₃。

進一步地，所述沉淀蛋白使用的沉淀劑為乙腈。

進一步地，所述渦旋的時間為3s；所述渦旋離心的條件為：渦旋5min，離心2490g，4℃，10min。