[發(fā)明專利]測定人血漿中托法替布濃度的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011151408.0
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112461946A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黎明;熊婉瑩;尹小麗
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南泰新醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
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• 代理人: 暫無信息

1.一種測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)樣品制備：取待測血漿樣本，加入內(nèi)標(biāo)工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液；

2)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測：

色譜條件如下：色譜柱：Waters Xselectable HSS T3；流動相：流動相A：0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈；洗脫方式：梯度洗脫；流速：0.400～0.600mL/min；

質(zhì)譜條件如下：采用ESI源，正離子MRM模式檢測；

3)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取托法替布標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，稀釋到空白血漿中，配制托法替布標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品；取標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品，加入內(nèi)標(biāo)工作溶液，渦旋，沉淀蛋白，渦旋離心，取上清液進樣LC-MS/MS系統(tǒng)，記錄每個濃度的托法替布對應(yīng)的峰面積，以托法替布和內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)，以托法替布濃度為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程；

4)待測物托法替布測定：將待測血漿按步驟1)制備樣品，按步驟2)采用LC-MS/MS方法檢測，記錄待測物托法替布對應(yīng)的峰面積，將待測物托法替布的色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值代入獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計算測定的待測物托法替布的相應(yīng)濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)工作溶液中的內(nèi)標(biāo)為托法替布-d₃；所述沉淀蛋白使用的沉淀劑為乙腈；所述渦旋的時間為3s；所述渦旋離心的條件為：渦旋5min，離心2490g，4℃，10min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定人血漿中托法替布濃度的方法，其特征在于，所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的條件如下：

色譜條件

色譜柱：Waters Xselectable HSS T3(2.1×100mm，3.5micron)

流動相A：0.1％甲酸水溶液；流動相B：乙腈

流速0.400～0.600mL/min；停止時間4.00min；

洗針液沖洗：2s；進樣量：20μL；柱溫：35℃；

流動相比例設(shè)置如下：

質(zhì)譜條件

采用ESI源，正離子MRM模式檢測：

質(zhì)譜切換閥設(shè)置如下：

	Start Time	Position
1	1.0	B
2	3.5	A

離子源參數(shù)設(shè)置如下：

Parameter	Value(+)
IS	5500
Gas1	60
Gas2	60
CAD	10
CUR	35
Temp(℃)	550

。