[發明專利]一種判斷家蠶化蛾時間的方法

有效

• 申請號: 202011151065.8
• 申請日: 2020-10-24
• 公開（公告）號: CN112322747B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 李兵;顧芝亞;葉文濤;李凡池;孫海娜;衛靜
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫周強;陶海鋒

本發明公開了一種判斷家蠶化蛾時間的方法，具體包括以下步驟：（1）分別構建待檢測品種雄蛹、雌蛹的溶繭酶(Cocoonase,Coc)基因的相對轉錄表達量與蛹期發育時間的關聯模型；（2）測定待檢測蠶蛹溶繭酶基因相對表達量，根據性別雌雄對照步驟（1）所得關聯模型，計算得出蛹期發育時間，進而判斷化蛾時間。該方法可通過對一個或多個蠶蛹的蛹期發育時間進行精確測定而精確判斷家蠶化蛾時間，可減少傳統肉眼觀察造成的誤差，為家蠶制種工作中判定化蛾時間提供新的檢測方法。

技術領域

本發明涉及一種判斷家蠶化蛾時間的方法，具體涉及一種基于基因相對轉錄表達量的家蠶蛹期發育時間的精確檢測方法。

背景技術

家蠶( Bombyx?mori)是一種重要的經濟昆蟲，在中國已經有5700多年的馴化歷史。家蠶的一生經歷4個不同的發育階段，即卵、幼蟲、蛹和成蟲。由蛹期到成蟲期的變態發育過程稱為羽化，這個過程一般經歷10~15天，一般上蔟后7天左右采繭。家蠶在蛹期不需要從外界環境攝取營養物質，但體內劇烈地進行著幼蟲組織器官的破壞，成蟲組織器官的發生形成。

目前生產技術中，傳統方法是在特定的溫濕度條件下（如溫度25±1℃，濕度75~80%）通過觀察蛹發育到后期顏色的變化（化蛹前顏色變深），并結合生產經驗來確定蛹期發育進程，進而推斷化蛾時間。由于不同品種或不同批次蛹的顏色存在差異，僅依靠傳統的肉眼觀察結合生產經驗很容易造成誤差。另外，家蠶種質資源是蠶業生產的寶貴財富，我國種質資源類型多樣，涵蓋繭色限性、粗纖度、細纖度等，保存種質資源對我國蠶桑產業具有重要的戰略意義，而其中能夠準確推斷化蛾時間進而快速有效開展制種工作，將稀缺的種質資源保留繼代下去顯得尤為重要。因此，需要尋找一種能夠對家蠶化蛾時間精確推斷的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種新的判斷家蠶化蛾時間的方法，以精確推斷家蠶的化蛾時間。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是：一種判斷家蠶化蛾時間的方法，包括以下步驟：

（1）分別構建家蠶雄蛹、雌蛹的溶繭酶基因的相對轉錄表達量與蛹期發育時間的關聯模型；

（2）測定待檢測家蠶的蠶蛹溶繭酶基因相對表達量，根據性別雌雄對照步驟（1）所得模型，從而確定蛹期發育時間，進而完成家蠶化蛾時間的判斷。

本發明中，步驟（1）、步驟（2）的家蠶品種一致，每個品種蛹期經歷時間確定。

本發明中，步驟（1）具體包括如下步驟：取與待檢測家蠶同品種的蠶蛹，分為雌雄兩組，第1次取材為化蛹2~3小時內的蛹的血液；然后每隔48小時取一次血液，直至化蛾；然后提取總RNA，經DNA酶處理后，反轉錄制備cDNA；以肌動蛋白基因3( Actin3)、溶繭酶基因分別為模板，通過Real-time?PCR法進行擴增；溶繭酶基因相對轉錄表達量即溶繭酶基因轉錄表達量/ Actin3基因轉錄表達量。然后依據蛹的性別分別建立溶繭酶相對轉錄表達量與蛹期發育時間的曲線方程，為關聯模型。

本發明中，步驟（2）具體包括如下步驟：首先鑒別待測蠶蛹的性別，然后提取待測定蠶蛹樣本血液的總RNA，經DNA酶處理后，反轉錄制備cDNA，以肌動蛋白基因3、溶繭酶基因分別為模板，通過Real-time?PCR反應進行擴增，計算待測樣本溶繭酶基因相對轉錄表達量，然后對照步驟（1）所得模型確定出待測蠶蛹的發育時間，以此推斷出化蛾時間。