[發(fā)明專利]一種判斷家蠶化蛾時間的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011151065.8 | 申請日： | 2020-10-24 |
| 公開（公告）號： | CN112322747B | 公開（公告）日： | 2023-08-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李兵;顧芝亞;葉文濤;李凡池;孫海娜;衛(wèi)靜 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 蘇州創(chuàng)元專利商標事務(wù)所有限公司 32103 | 代理人： | 孫周強;陶海鋒 |
| 地址： | 215137 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 判斷 家蠶 時間 方法 | ||
1.一種判斷家蠶化蛾時間的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）分別構(gòu)建家蠶雄蛹、雌蛹的溶繭酶基因的相對轉(zhuǎn)錄表達量與蛹期發(fā)育時間的關(guān)聯(lián)模型；蛹期發(fā)育時間起點為化蛹2~3小時，終點為化蛾；
（2）測定待檢測家蠶的蠶蛹溶繭酶基因相對表達量，根據(jù)性別雌雄對照步驟（1）所得模型，從而確定蛹期發(fā)育時間，進而完成家蠶化蛾時間的判斷；
步驟（1）中，取每個蛹期發(fā)育時間下蠶蛹的血液，提取總RNA，經(jīng)DNA酶處理后，反轉(zhuǎn)錄制備cDNA；以肌動蛋白基因3、溶繭酶基因為模板，通過實時熒光定量PCR反應(yīng)進行擴增，分別得到肌動蛋白基因3轉(zhuǎn)錄表達量、溶繭酶基因轉(zhuǎn)錄表達量；溶繭酶基因相對轉(zhuǎn)錄表達量為溶繭酶基因的轉(zhuǎn)錄表達量/肌動蛋白基因3的轉(zhuǎn)錄表達量；
步驟（2）中，取待檢測家蠶的蠶蛹的血液，提取總RNA，經(jīng)DNA酶處理后，反轉(zhuǎn)錄制備cDNA；以肌動蛋白基因3、溶繭酶基因為模板，通過實時熒光定量PCR反應(yīng)進行擴增，分別得到肌動蛋白基因3轉(zhuǎn)錄表達量、溶繭酶基因轉(zhuǎn)錄表達量；溶繭酶基因相對轉(zhuǎn)錄表達量為溶繭酶基因的相對表達量/肌動蛋白基因3的轉(zhuǎn)錄表達量；
熒光定量PCR反應(yīng)時，引物如下:
5’-TCGCCGGATCGAAACTGAAA-3’
5’-GCACCGTTACTTTGGAAATACCTT-3’
5’-CGGCTACTCGTTCACTACC-3’
5’-CCGTCGGGAAGTTCGTAAG-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述判斷家蠶化蛾時間的方法，其特征在于，步驟（1）、步驟（2）的家蠶品種一致。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述家蠶化蛾時間的檢測方法，其特征在于：步驟（1）中，在常規(guī)環(huán)境條件下保護蠶蛹由化蛹至化蛾；相鄰蛹期發(fā)育時間間隔為48小時。
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