[發(fā)明專利]一種谷胱甘肽的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011150317.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN112321675B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊愛華;馬貴軍;鄔菊花;茹江敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古拜克生物有限公司
• 主分類號(hào): C07K5/037
• 分類號(hào): C07K5/037;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/36
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 宋秀蘭

本發(fā)明涉及分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種谷胱甘肽的純化方法。本發(fā)明從谷胱甘肽發(fā)酵菌體懸浮液中純化還原型谷胱甘肽的方法，將釀酒酵母菌泥經(jīng)稀釋、破碎、離心，收集水相，在堿性條件下將谷胱甘肽和氯甲基聚苯乙烯樹脂反應(yīng)，將樹脂過濾洗滌后，脫除樹脂，收集谷胱甘肽，最后經(jīng)過乙醇重結(jié)晶，即得精制的谷胱甘肽。本發(fā)明采用合適的氯甲基聚苯乙烯樹脂的用量，即保證了谷胱甘肽的回收率，又避免了過多用量導(dǎo)致的產(chǎn)品中雜質(zhì)過多的情況。同時(shí)，本發(fā)明的提純方法對(duì)谷胱甘肽發(fā)酵菌體懸浮液不需要做特殊要求，只要所述懸浮液可以達(dá)到本發(fā)明所要求的GSH含量即可，使用范圍廣泛。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種谷胱甘肽的純化方法。

背景技術(shù)

谷胱甘肽(GSH)是一種具有重要生理功能的活性三肽，它由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。谷胱甘肽在體內(nèi)以兩種形態(tài)存在，即還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽(oxidizedglutathione，簡(jiǎn)稱GSSG)。通常人們所指的谷胱甘肽是還原型谷胱甘肽。還原型谷胱甘肽很容易被氧化，兩分子谷胱甘肽的活潑巰基氧化脫氫后以二硫鍵相連得到的二聚體，即是氧化型谷胱甘肽。其中只有還原型谷胱甘肽才具有生理活性，而生物體內(nèi)的氧化型谷胱甘肽需經(jīng)還原后才能發(fā)揮生理功能。

谷胱甘肽是一種白色晶體，相對(duì)分子質(zhì)量為307.33，熔點(diǎn)是192～195℃(分解)，等電點(diǎn)為5.93。比旋光度[α]D20為+17.60°(C＝0.05，H2O)，易溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰氨，不溶于乙醚和丙酮。谷胱甘肽固體較為穩(wěn)定，而水溶液在空氣中易被氧化，谷胱甘肽在高水分活度下不易保存，只有將水分活度控制在0.3以下才能長(zhǎng)期穩(wěn)定保存。

中國專利(申請(qǐng)?zhí)?00810233834.1)“一種從谷胱甘肽發(fā)酵液中提取分離谷胱甘肽的方法”中，提供了一種谷胱甘肽的提取方法：在3000rpm下離心發(fā)酵液10-15min，獲得酵母細(xì)胞沉淀，加入6-10倍的去離子水，在沸水中抽提，使用磁性納米材料吸附谷胱甘肽，用電場(chǎng)沉降分離后，0.1-0.6mol/L的酸解析，解析液經(jīng)過電滲處理，再減壓濃縮，冷凍干燥，提取收率達(dá)到70.3％，純度98.5％。

中國專利201210111271.5“從含有還原型谷胱甘肽的發(fā)酵抽提液中分離純化還原型谷胱甘肽的方法”中，發(fā)酵抽提液用凝膠型強(qiáng)堿樹脂純化，解析后再上含鹵素的非極性樹脂，解析后，濃縮，加入晶種，低級(jí)醇或丙酮，攪拌下結(jié)晶，過濾，干燥，重量純度達(dá)到99.73％(折干)。

以上對(duì)于谷胱甘肽提純工藝的探討，有微波破碎細(xì)胞后抽提，沸水抽提，樹脂、磁性納米材料吸附處理后，凍干、結(jié)晶干燥得到成品，對(duì)結(jié)晶的討論滴加乙醇，加晶種、控制攪拌速度的傳統(tǒng)結(jié)晶方法，使產(chǎn)品純度和收率提高。.

發(fā)明內(nèi)容

為了解決谷胱甘肽純化工藝復(fù)雜，純化過程中容易產(chǎn)生氧化型谷胱甘肽的的問題。

本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單，可以避免氧化性谷胱甘肽產(chǎn)生的谷胱甘肽純化方法。

本發(fā)明提供了一種谷胱甘肽的純化方法，包括以下步驟：

步驟1)取谷胱甘肽發(fā)酵菌體懸浮液，加入等體積蒸餾水稀釋，經(jīng)破碎后，直接煮沸提取，提取后離心，收集水相。

步驟2)在攪拌條件下向步驟1)的水相中加入氯甲基聚苯乙烯樹脂和堿進(jìn)行反應(yīng)；反應(yīng)完成后，過濾，水洗，醇洗，抽干，得連接有谷胱甘肽的樹脂；

步驟3)將步驟2)得到的連接有谷胱甘肽的樹脂均勻分散在溶劑中，加入三氟乙酸和三乙基硅烷進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)完成后，過濾，濾餅用水洗滌，合并濾液，減壓除去溶劑，得到谷胱甘肽粗品。

步驟4)將步驟3)的谷胱甘肽粗品使用乙醇重結(jié)晶，過濾，使用乙醇洗滌濾餅，干燥即得谷胱甘肽純品。

進(jìn)一步地，所述步驟1)中，所述谷胱甘肽菌體懸浮液中GSH含量≥6mmol/L。