[發明專利]一種谷胱甘肽的純化方法

有效

• 申請號: 202011150317.5
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112321675B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 楊愛華;馬貴軍;鄔菊花;茹江敏
• 申請（專利權）人: 內蒙古拜克生物有限公司
• 主分類號: C07K5/037
• 分類號: C07K5/037;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/36
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 宋秀蘭

1.一種谷胱甘肽的純化方法，包括以下步驟：

步驟1)取谷胱甘肽發酵菌體懸浮液，加入等體積蒸餾水稀釋，經破碎后，直接煮沸提取，提取后離心，收集水相；

步驟2)在攪拌條件下向步驟1)的水相中加入氯甲基聚苯乙烯樹脂和堿進行反應；反應完成后，過濾，水洗，醇洗，抽干，得連接有谷胱甘肽的樹脂；

步驟3)將步驟2)得到的連接有谷胱甘肽的樹脂均勻分散在溶劑中，加入三氟乙酸和三乙基硅烷進行反應，反應完成后，過濾，濾餅用水洗滌，合并濾液，減壓除去溶劑，得到谷胱甘肽粗品；

步驟4)將步驟3)的谷胱甘肽粗品使用乙醇重結晶，過濾，使用乙醇洗滌濾餅，干燥即得谷胱甘肽純品。

2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述步驟1)中，所述谷胱甘肽菌體懸浮液中GSH含量≥6mmol/L。

3.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述反應以GSH的摩爾量為1eq，所述步驟2)中，氯甲基聚苯乙烯樹脂以活性基團的含量計，用量為0.9-1.1eq，所述堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉和碳酸鉀中的至少一種，用量為1.5-2.0eq。

4.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述氯甲基聚苯乙烯樹脂的基團載量為1.2-1.5mmol/g。

5.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述堿為氫氧化鈉和碳酸鉀中的至少一種。

6.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述反應溫度為-5-0℃，所述反應時間為4-6h，所述水洗是水洗至流出液pH＝7-8。

7.根據權利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述步驟3)中，所述溶劑為乙醇、甲醇和四氫呋喃中的至少一種和水的混合溶劑，溶劑用量GSH的摩爾量比為6-8L/mol，所述三氟乙酸的用量以體積計，為溶劑用量的1/5-1/3；所述三乙基硅烷的用量為10-15eq；所述反應的溫度為20-30℃，反應時間為8-16h，反應完成后，過濾，濾餅用水洗滌，合并濾液，減壓除去溶劑，得到谷胱甘肽粗品。

8.根據權利要求7所述的純化方法，其特征在于，所述步驟3)中，所述溶劑為水。

9.根據權利要求8所述的純化方法，其特征在于，所述步驟3)中，所述濾餅用水洗滌中，水的用量和GSH的摩爾量比為7-10L/mol，洗滌次數為1-3次。

10.根據權利要求1或2所述的純化方法，其特征在于，所述步驟4)中，所述乙醇的用量和GSH的摩爾量比為1.5-2.5L/mol，所述洗滌為用乙醇洗滌1-3次。