[發明專利]一種檢測三七葉片皂苷的HPLC方法

在審

• 申請號: 202011150157.4
• 申請日: 2020-10-24
• 公開（公告）號: CN112285239A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 張廣輝;賈兵;范偉;陳庚;李曉波;李瑩;宋婉玲;楊生超;盧迎春;劉冠澤;張雙艷;林源
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/60
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;陳左

本發明涉及一種檢測三七葉片皂苷的HPLC方法，屬于醫學技術領域。該方法包括供試樣品溶液的制備、對照品溶液的制備、色譜條件、色譜峰測定等幾大步驟。本發明的HPLC方法可在短時間準確測出三七葉中人參皂苷Rb₁、Rc、Rb₂、Rb₃，三七皂苷Fa、Fe及七葉膽苷XⅦ7種皂苷單體含量，且該方法在精密度、穩定性、重復性、最低檢測限、加樣回收率上均符合《中華人民共和國藥典》相關標準，快速簡便，穩定可靠，易于推廣應用。

技術領域

本發明屬于醫學技術領域，涉及一種檢測三七葉片皂苷的HPLC方法。特別涉及HPLC法分析檢測三七葉中的7種皂苷單體含量，具體而言，涉及建立的三七葉皂苷單體HPLC分析檢測方法定量方法。

背景技術

三萜類皂苷是三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen ex C.Chow]最主要的藥效活性物質。研究表明三七根中既含有人參二醇型皂苷，又含有人參三醇型皂苷。在幾十種皂苷中，皂苷單體以人參皂苷Rg₁、Rb₁、Rd和三七皂苷R₁為主，含量約占總皂苷的80％左右。與三七傳統的藥用部位根相比，三七葉中藥用活性成分同樣豐富。到目前為止，共從三七葉中分離鑒定出26種皂苷單體，主要是原人參二醇型皂苷，包括人參皂苷Rb₁以及三七根中罕見的人參皂苷Rc、Rb₂和Rb₃為主。

目前對三七葉片中皂苷單體的檢測方法還比較滯后，主要表現在一次檢出三七葉皂苷單體種類較少。如王隸書等檢測出人參皂苷Rb₃，朱潔等檢測出人參皂苷Rb₃、Rc和Rb₁，而劉英等檢測出人參皂苷Rb₁、Rc、Rb₂和Rb₃四種單體。目前，隨著三七功效研究的深入和產品開發的多元化，對三七葉的利用正在受到人們的日益關注和重視。因此，如何建立高效的三七葉皂苷的鑒定方法，并以此為基礎探尋提高三七葉片中皂苷含量的途徑顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種檢測三七葉片皂苷的HPLC方法。本發明建立的檢測方法在精密度、穩定性、重復性、最低檢測限、加樣回收率上均符合《中華人民共和國藥典》相關標準，且快速簡便，穩定可靠，可在52分鐘內準確測出三七葉中的7種皂苷單體含量。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種檢測三七葉片皂苷的HPLC方法，包括如下步驟：

步驟(1)，供試樣品溶液的制備：將三七葉在采收后及時烘干，溫度為55℃-60℃，研磨成粉末狀，過45目篩，過篩后的篩下三七葉粉加入氯仿，靜置過夜10-12h，過濾，棄除上清液，取沉淀，待沉淀自然風干后再加入氯仿，靜置2-3h后，再次過濾，取沉淀，待沉淀自然風干后，取風干后粉末加入甲醇，靜止30-40min后超聲提取20-30min，靜置1-2h，使之冷卻至室溫，最后用甲醇精密定量，緩慢搖勻，靜置30-40min后，取液體，使用0.45微米濾膜過濾，獲得供試液；

其中，三七葉粉、第一次氯仿用量、第二次氯仿用量的比例為1g：50mL：30mL；風干后粉末與甲醇用量的比例為0.6g：50mL；最后用甲醇精密定量至風干后粉末與最終精密定量體積的比例為0.6g：50mL；