[發(fā)明專利]一種檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011150157.4
• 申請(qǐng)日: 2020-10-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112285239A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張廣輝;賈兵;范偉;陳庚;李曉波;李瑩;宋婉玲;楊生超;盧迎春;劉冠澤;張雙艷;林源
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/60
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;陳左

1.一種檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟（1），供試樣品溶液的制備：將三七葉在采收后及時(shí)烘干，溫度為55℃-60℃，研磨成粉末狀，過(guò)45目篩，過(guò)篩后的篩下三七葉粉加入氯仿，靜置過(guò)夜10-12h，過(guò)濾，棄除上清液，取沉淀，待沉淀自然風(fēng)干后再加入氯仿，靜置2-3h后，再次過(guò)濾，取沉淀，待沉淀自然風(fēng)干后，取風(fēng)干后粉末加入甲醇，靜止30-40min后超聲提取20-30min，靜置1-2h，使之冷卻至室溫，最后用甲醇精密定量，緩慢搖勻，靜置30-40min后，取液體，使用0.45微米濾膜過(guò)濾，獲得供試液；

其中，三七葉粉、第一次氯仿用量、第二次氯仿用量的比例為1g：50mL：30mL；風(fēng)干后粉末與甲醇用量的比例為0.6g：50mL；最后用甲醇精密定量至風(fēng)干后粉末與最終精密定量體積的比例為0.6g：50mL；

步驟（2），對(duì)照品溶液的制備：取人參皂苷Rb₁、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb₂、人參皂苷Rb₃、三七皂苷Fa、三七皂苷Fe及七葉膽苷XⅦ對(duì)照品，加入到甲醇中，制得混合對(duì)照品溶液；混合對(duì)照品溶液中人參皂苷Rb₁、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb₂、人參皂苷Rb₃、三七皂苷Fa、三七皂苷Fe及七葉膽苷XⅦ對(duì)照品的濃度分別為330 μg/ml、222 μg/ml、230 μg/ml、310 μg/ml、231μg/ml、204 μg/ml、248 μg/ml的混合對(duì)照品溶液；

步驟（3），色譜條件：色譜柱以SB-C18為填充劑，以質(zhì)量濃度為0.2%的磷酸水溶液為A流動(dòng)相，以乙腈為B流動(dòng)相進(jìn)行線性梯度洗脫；進(jìn)樣體積10μL，流速1.0mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，理論板數(shù)不低于5000；

步驟（4），色譜峰測(cè)定：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液注入高效液相色譜儀，計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即計(jì)算出人參皂苷Rb₁、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb₂、人參皂苷Rb₃、三七皂苷Fa、三七皂苷Fe及七葉膽苷XⅦ的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法，其特征在于，所述的色譜柱為安捷倫ZORBAX SB-C18，250 mm × 4.6 mm，5 μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法，其特征在于，高效液相色譜儀Agilent 1260型高效液相色譜儀，儀器組成包括G1311C四元泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣儀和G1315D光電二極管陣列檢測(cè)器。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法，其特征在于，線性梯度洗脫程序如下：

0-28min，流動(dòng)相B相所占的體積比為27%；

28-44min，流動(dòng)相B相所占的體積比為34%；

44-47min，流動(dòng)相B相所占的體積比為39%；

47-50min，流動(dòng)相B相所占的體積比為60%；

50-52min，流動(dòng)相B相所占的體積比為80%；

52min之后，流動(dòng)相B相所占的體積比為85%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)三七葉片皂苷的HPLC方法，其特征在于，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的繪制：將制備的人參皂苷Rb₁、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb₂、人參皂苷Rb₃、三七皂苷Fa、三七皂苷Fe及七葉膽苷XⅦ對(duì)照品溶液分別稀釋3.30、2.22、2.30、3.10、2.31、2.04、2.48倍，之后在步驟（3）的色譜條件下，注入高效液相色譜儀，分別計(jì)算同一保留時(shí)間下的峰面積，以濃度x為橫坐標(biāo)，以峰面積y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y＝f(x)。