[發明專利]一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽、制備方法及免疫層析應用

在審

• 申請號: 202011149820.9
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112326623A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 王升啟;肖瑞;汪崇文;劉曉嫻;劉海峰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/58
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發明公開了一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽、制備方法及免疫層析應用。該雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽由內到外依次包括：SiO₂內核、PEI層、膠體金層、第一DTNB層、納米Ag層和第二DTNB層；所述第二DTNB層的表面耦聯新型冠狀病毒重組抗原S蛋白。本發明還公開了上述復合納米標簽的制備方法以及其在免疫層析檢測中的應用。該復合納米標簽在短時間內，同時檢測臨床血液樣本中抗新冠IgM和IgG，具有超高的靈敏度及100％的準確度；并且分散性好、穩定性強且易于大批量制備，可用于復雜樣本體系中目標物質的捕獲、富集及快速檢測。

技術領域

本發明涉及新型納米材料及表面增強拉曼散射(SERS)領域，具體涉 及一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽、制備方法及免疫層析 應用。

背景技術

新型冠狀病毒(COVID-19)具有高度傳染性，容易通過空氣(氣溶膠、呼 吸道飛沫)和直接接觸身體表面傳播。一些COVID-19患者無明顯癥狀，但 仍有傳染性。到目前為止可以預防或治療COVID-19的疫苗和藥物少之甚 少，因此，及時、準確地診斷疑似病例是控制疫情的最有效途徑。實時逆 轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和計算機斷層成像等常用診斷技術已應用于 COVID-19的臨床診斷，對重癥患者具有良好的準確性和可靠性。但這些方 法存在假陰性率較高，檢測時間長、檢測地點具體、需要專業人員且設備 昂貴等缺點并且在早期患者和無癥狀攜帶者的快速篩查方面仍有不足之 處。

SERS免疫層析檢測是一種將SERS與標記免疫學相結合，利用SERS 的高靈敏度和光譜選擇性，結合抗體抗原的特異反應作用而進行的免疫分 析技術。將SERS標記檢測技術與免疫層析檢測技術相結合，近年來已成為 相關領域研究的熱點。但傳統依賴金/銀膠體作為基底的免疫層析技術具有 檢測靈敏度低、只能定性或半定量檢測的缺陷。SiO₂納米顆粒具有穩定性 好、分散性強、粒徑大小可控、生物毒性低且可通過離心分離，離心后不 易團聚等優點。所以基于SiO₂納米顆粒合成的新型拉曼增強納米材料可代 替傳統金/銀膠體SERS標簽作為多功能SERS標簽用于免疫層析檢測。

因此，特提出本發明。

發明內容

本發明提供了一種新型雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽， 所述復合納米標簽具有可控粒徑、單分散性好的特點；所述雙層拉曼分子 標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備基于聚乙酰亞胺(PEI)自組裝，制備 過程簡單、高效、可重復。本發明還提供了上述雙層拉曼分子標記的硅核 銀殼拉曼增強納米標簽作為SERS標簽在免疫層析系統檢測中的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽，包括：由內到外依 次包括：SiO₂內核、PEI層、膠體金層、第一DTNB層、納米Ag層和第二 DTNB層；

所述第二DTNB層的表面耦聯新型冠狀病毒重組抗原S蛋白。

DTNB是指5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoicacid))的簡稱。

作為一個總的發明構思，本申請還提供了一種雙層拉曼分子標記的硅 核銀殼復合納米標簽的制備方法，具體為以下步驟:

(1)在SiO₂表面沉積PEI形成表面帶正電荷的SiO₂@PEI顆粒，將 SiO₂@PEI顆粒加入到膠體金溶液中制備SiO₂@Au-seed復合物；