[發明專利]一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽、制備方法及免疫層析應用

在審

• 申請號: 202011149820.9
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112326623A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 王升啟;肖瑞;汪崇文;劉曉嫻;劉海峰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/532;G01N33/58
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽，其特征在于，由內到外依次包括：SiO₂內核、PEI層、膠體金層、第一DTNB層、納米Ag層和第二DTNB層；

所述第二DTNB層的表面耦聯新型冠狀病毒重組抗原S蛋白。

2.一種雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在SiO₂表面沉積PEI形成表面帶正電荷的SiO₂@PEI顆粒，將SiO₂@PEI顆粒加入到膠體金溶液中制備SiO₂@Au-seed復合物；

(2)將步驟(1)所得的SiO₂@Au-seed復合物在超聲條件下與DTNB溶液反應，形成SiO₂@Au-seed/DTNB納米顆粒；

(3)將步驟(2)所得的SiO₂@Au-seed/DTNB納米顆粒以PVP作為保護劑，AgNO₃為原料，氨水為催化劑，甲醛為還原劑，將銀離子快速還原沉積，形成納米銀外殼的SiO₂@Ag納米顆粒；

(4)將步驟(3)所得的SiO₂@Ag納米顆粒在超聲條件下再次與DTNB溶液反應，形成SiO₂@Ag/DTNB納米顆粒；

(5)將步驟(4)所得的SiO₂@Ag/DTNB納米顆粒在碳二亞胺溶液和N-羥基琥珀酰亞胺溶液的作用下，末端羧基被活化直接耦聯新型冠狀病毒重組抗原S蛋白形成雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽。

3.根據權利要求2所述的雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備方法，其特征在于，步驟(1)包括：

將SiO₂水溶液加入到PEI溶液中，通過超聲反應使PEI在SiO₂納米顆粒表面自組裝形成表面帶正電荷的SiO₂@PEI顆粒；

將合成的SiO₂@PEI顆粒加入到帶負電的3nm膠體金中，通過超聲反應使所述SiO₂@PEI顆粒表面吸附一層膠體金顆粒，獲得SiO₂@Au-seed復合物；

優選地，所述PEI溶液的濃度為0.5mg/mL～5mg/mL，優選為1mg/mL；所述超聲的時長為20～60min，優選為40min。

4.根據權利要求2所述的雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備方法，其特征在于，所述DTNB溶液的濃度為10mM；所述超聲的時長為20～60min，優選為30min。

5.根據權利要求2所述的雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述AgNO₃的濃度為0.1～0.5mM，優選為0.35mM；甲醛與氨水的比例為2:1～3:1，優選為2:1。

6.根據權利要求2-5任一項所述的雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述DTNB的羧基基團與所述新型冠狀病毒重組抗原S蛋白的氨基端耦聯形成肽鏈。

7.根據權利要求1所述的雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽在免疫層析中的應用，其特征在于，所述應用包括：

將所述雙層拉曼分子標記的硅核銀殼復合納米標簽重懸于緩沖液中，加入金標稀釋液混勻后鋪在硝酸纖維素膜上制作結合墊；

在同一硝酸纖維素膜上包被兩條檢測線，分別為抗人IgM和抗人IgG；一條質控線，為S蛋白抗體；

將所述結合墊、所述硝酸纖維素膜與吸水墊、樣品墊，底板組裝成試紙條；

將待測樣品分別滴加到免疫層析試紙條的樣品墊上，靜置15-20分鐘后，同時讀取兩條檢測線上的拉曼信號，達到對陽性血清中IgM、IgG兩種抗體同時定量檢測。