[發明專利]一種高靈敏度的單組分TMB顯色液及其制備方法

在審

• 申請號: 202011149776.1
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112410399A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 周志鵬
• 申請（專利權）人: 杭州聯科生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/28
• 分類號: C12Q1/28
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 周瓊

1.一種高靈敏度的單組分TMB顯色液，其特征在于，包括以下組分：聚乙烯醇0.001g/L-20g/L，木糖0.16g/L-30g/L，檸檬酸1mM-100mM，乙二胺四乙酸二鈉1mM-20mM，30％過氧化氫水溶液1mM-10mM，TMB 1mM-3mM，DMSO20ml/L-30ml/L，Proclin3000.04％，磷酸氫二鈉1mM-25mM，超純水定容至1L。

2.根據權利要求1所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液，其特征在于，所述單組分TMB顯色液采用檸檬酸和磷酸氫二鈉緩沖液，且緩沖液的pH值為3.1-3.6。

3.根據權利要求1所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液，其特征在于，所述聚乙烯醇為1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度為1700，醇解度為88％。

4.根據權利要求1-3任一項所述的一種高靈敏度的單組分TMB顯色液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：試劑母液配制：

1.1：50g/L聚乙烯醇配制：準確稱取5g 1788低粘度型聚乙烯醇于燒杯中，加入適量超純水，置于65℃恒溫水浴鍋中，通過玻璃棒持續攪拌使顆粒分散均勻，溶解后繼續保溫2小時，超純水定容至100ml，使用0.45μm濾膜過濾；

1.2：TMB母液配制：準確稱取TMB粉末于離心管中，加入適量的DMSO，渦旋振蕩使其充分溶解，并在避光條件下待用；

1.3：其他試劑分別按照配方所用濃度要求配制；

步驟二：TMB體系配制：

2.1：首先在燒杯中加入適量超純水，加入1788低粘度型聚乙烯醇母液，接著在磁力攪拌器上攪拌均勻，再依次加入木糖、檸檬酸及乙二胺四乙酸二鈉，攪拌混勻；

2.2：然后，加入30％過氧化氫水溶液并攪拌均勻；

2.3：隨后，將燒杯用錫箔紙包裹住，加入TMB母液并攪拌均勻；

2.4：接著，加入Proclin300并攪拌混勻，用磷酸二氫鈉溶液調整體系pH值為3.1-3.6，超純水定容至1L；

2.5：最后，使用0.22μm尼龍濾膜過濾，獲得均一溶液，保存在棕色塑料瓶中，密封避光2-8℃存儲。

5.根據權利要求4所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液及其制備方法，其特征在于，所述TMB顯色液配制過程采用配制母液的方式配制各個組分，且木糖除外，再按次序混合。

6.根據權利要求1所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液及其制備方法，其特征在于，所述TMB顯色液配制過程所使用的燒杯、玻璃棒以及超純水均經過高溫高壓滅菌處理。

7.根據權利要求1所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液及其制備方法，其特征在于，所述TMB體系配制的前一個組分混勻后再添加后一個。

8.根據權利要求1所述一種高靈敏度的單組分TMB顯色液及其制備方法，其特征在于，所述尼龍濾膜為有機溶劑耐受型。