[發明專利]基于超高效液相色譜-高分辨質譜技術定量檢測沙棘中黃酮類化合物的方法

有效

• 申請號: 202011144471.1
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112526047B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 嚴華;崔鳳云;張朝暉;別瑋;劉韋華;齊鶴鳴;李子譯
• 申請（專利權）人: 中國海關科學技術研究中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.基于超高效液相色譜-高分辨質譜技術定量檢測黃酮類化合物的方法，其特征在于，所述黃酮類化合物包括山柰酚、圣草酚、兒茶素、表兒茶素、槲皮素、二氫槲皮素、異鼠李素、二氫楊梅素、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、異鼠李素-戊糖苷、槲皮素-3-O-異鼠李素、異鼠李素-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、異夏佛塔苷、槲皮素-3-O-戊糖苷-7-O-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷、異鼠李素-3-O-α-L-阿拉伯糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖苷、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-葡糖糖-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-龍膽二糖苷、異鼠李素-二己糖苷、山奈酚-3-O-槐二糖-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖鼠李糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖苷-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖葡萄糖苷、異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷和異鼠李素-3-O-蕓香糖-7-O-葡萄糖苷33種黃酮類化合物；

所述方法包括如下步驟：

建立黃酮類化合物的標準曲線：

選擇24種黃酮類化合物作為標準對照品，以甲醇為溶劑配制24種黃酮類化合物的標準對照品儲備液，吸取各標準對照品儲備液混勻，用甲醇稀釋得到混合標準中間液，吸取混合標準中間液，用NH₄Ac-乙腈進行稀釋得到5-10個含有已知濃度的24種黃酮類化合物的混合標準工作液；所述24種黃酮類化合物包括山柰酚、圣草酚、兒茶素、表兒茶素、槲皮素、二氫槲皮素、異鼠李素、二氫楊梅素、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-異鼠李素、異鼠李素-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、異夏佛塔苷、異鼠李素-3-O-α-L-阿拉伯糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖苷、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-龍膽二糖苷、山奈酚-3-O-槐二糖-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖鼠李糖苷、槲皮素-3-O-蕓香糖苷-7-O-葡萄糖苷、異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷；

在相同的色譜條件和質譜條件下，將各混合標準工作液分別進行超高效液相色譜分離和高分辨質譜檢測，確定各色譜圖中各色譜峰的黃酮類化合物并獲得各黃酮類化合物的色譜峰面積；

以各黃酮類化合物的濃度為橫坐標，各黃酮類化合物的色譜峰面積為縱坐標，建立各黃酮類化合物的標準曲線；

獲得待測樣品的色譜峰面積：

在與建立黃酮類化合物的標準曲線相同的色譜條件和質譜條件下對待測樣品溶液進行超高效液相色譜分離和高分辨質譜檢測，確定各色譜圖中各色譜峰的黃酮類化合物及對應的色譜峰面積；

確定待測樣品中33種黃酮類化合物的含量：

對于有標準對照品的各黃酮類化合物，根據已建立的各黃酮類化合物的標準曲線和待測樣品的各黃酮類化合物的色譜峰面積，分別獲得待測樣品的有標準對照品的各黃酮類化合物的含量；

對于有同分異構體但無標準對照品的各黃酮類化合物，根據已建立的黃酮類化合物的同分異構體的標準曲線和待測樣品的各黃酮類化合物的色譜峰面積，分別獲得待測樣品的有同分異構體但無標準對照品的各黃酮類化合物的含量；

對于既無同分異構體又無標準對照品的各黃酮類化合物，根據已建立的槲皮素-3-O-蕓香糖苷的標準曲線和待測樣品的各黃酮類化合物的色譜峰面積，分別獲得待測樣品的既無同分異構體又無標準對照品的各黃酮類化合物的含量；

所述色譜條件為：

色譜柱：Waters?HSS?T3色譜柱，規格為2.1mm×150mm，1.7μm；

流動相：A相為5mmol/L醋酸銨溶液、B相為乙腈；

梯度洗脫程序：

0～2min，10％B；2～12min，10％～90％B；12～17min，90％B；17～17.1min，90％～10％B；17.1～20min，10％B；

柱溫：35℃；

體積流量：0.20mL/min；

進樣體積：10μL；

所述質譜條件為：

四級桿-靜電場軌道阱超高分辨質譜系統，離子源為加熱電噴霧離子源，參數如下：電離模式為負離子模式，噴霧電壓為3.2kV，毛細管溫度和輔助氣溫度分別為325℃和350℃，鞘氣流速和輔助氣流速分別為40L/min和10L/min，S-lens?RF值為60，噴霧氣和碰撞氣均為氮氣；

掃描方式為Full?MS模式，參數如下：分辨率70?000FWHM，掃描范圍m/z?200-1000，自動增益控制為1e6，最大注入時間為100ms。