[發明專利]基于超高效液相色譜-高分辨質譜技術定量檢測沙棘中黃酮類化合物的方法

有效

• 申請號: 202011144471.1
• 申請日: 2020-10-23
• 公開（公告）號: CN112526047B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 嚴華;崔鳳云;張朝暉;別瑋;劉韋華;齊鶴鳴;李子譯
• 申請（專利權）人: 中國海關科學技術研究中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發明公開一種基于超高效液相色譜?高分辨質譜技術定量檢測沙棘中黃酮類化合物的方法。本發明定量檢測黃酮類化合物的方法包括：建立黃酮類化合物的標準曲線；獲得待測樣品的色譜峰面積；獲得待測樣品中黃酮類化合物的含量。本發明基于超高效液相色譜?高分辨質譜技術定量檢測沙棘中黃酮類化合物的方法，準確反映了沙棘中主要黃酮類化合物的真實含量，解決了目前沙棘中黃酮類化合物定性難、定量結果不準的問題，為開展沙棘果實質量等級劃分提供了新的技術方案，方法靈敏度和分辨率高、結果穩定，可滿足快速、高通量和準確檢測的需求，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及分析檢測領域。更具體地，涉及基于超高效液相色譜-高分辨質譜技術定量檢測沙棘中黃酮類化合物的方法。

背景技術

沙棘是一種藥食同源的植物，其功效成分主要包括多糖類、黃酮類、維生素類、脂類、三萜類及甾醇類等。沙棘中的黃酮類化合物在保護心血管系統、改善血液系統、增強免疫、抗氧化、抗癌、抗過敏、抑菌等方面均具有顯著的藥理活性，是衡量沙棘產品質量的重要指標。《中國藥典》2015版一部(國家藥典委員會.《中國藥典》.2015年版.一部[S].2015:23,184.)沙棘的含量測定項中，總黃酮含量測定方法是以蘆丁為對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，反應液于500nm測定吸收值，進行計算。異鼠李素以高效液相色譜法進行分析。郭亞健等(郭亞健,張蘭珍.關于《中國藥典》2005?年版中山楂葉、沙棘總黃酮含量測定的商榷.中國藥品標準，2010,11(4)：?246-247.)指出，《中國藥典》中總黃酮含量測定方法，不是黃酮類成分含量測定的專屬方法，并不能反映沙棘中黃酮的真實含量。當一個供試品溶液中既含蘆丁等結構類似的黃酮類化合物，也含有綠原酸或咖啡酸或原兒茶醛等非黃酮類化合物，或當一個供試品溶液中既有蘆丁及其結構類似成分，又有山奈酚等黃酮，采用總黃酮含量測定方法所得結果均不能反應真實的總黃酮的含量。另外，沙棘中含有的黃酮類化合物有異鼠李素、槲皮素、以及以山柰酚為苷元的低聚糖苷，采用總黃酮含量測定方法所測得結果未包括山柰酚、異鼠李素的苷類成分，因此所得結果不是真實的總黃酮含量。由此可見，對沙棘的質量進行評價的傳統分析技術存在著明顯的技術缺陷，亟需發展新的質量評價體系，采用新的分析方法對沙棘中的黃酮進行定性和定量分析。

黃酮類化合物的定性方法主要包括紫外光譜法(UV)、紅外光譜法(IR)、核磁共振法(NRM)、液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜法(LC-MS)等。高分辨質譜由于分辨率高，選擇性好，在化合物結構鑒定方面具有較大優勢，為沙棘黃酮苷元結構鑒定提供了新的分析手段。Ma等(Ma?XY,O?Laaksonen,Zheng?J,et?al.Flavonol?glycosides?in?berries?of?twomajor?subspecies?of?sea?buckthorn(?rhamnoides?L.)and?influence?ofgrowth?sites.Food?Chemistry,2016,200:189-198.)采用HPLC-DAD-MS/MS分析技術，對中國四川、芬蘭、加拿大等地的沙棘進行了鑒定和量化，共發現26種黃酮醇苷類化合物，并以異鼠李素和槲皮素為主要配基。秦振嫻等(秦振嫻，張瑜，齊夢蝶，等.中國沙棘和西藏沙棘葉中化學成分的UPLC/Q-TOF-MS快速分析,?中國中藥雜志，2016,41(8)：1461-1468.)采用UPLC-Q-TOF-MS技術，在中國沙棘和西藏沙棘葉中發現了35種黃酮類化合物。