[發明專利]一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法

在審

• 申請號: 202011141235.4
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112345766A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 彭述明;楊宇川;錢達志;楊夏;王靜;卓連剛;廖偉;王關全;趙鵬
• 申請（專利權）人: 中國工程物理研究院核物理與化學研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/53;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 成都帝鵬知識產權代理事務所(普通合伙) 51265
• 代理人: 李華

本發明提供了一種熒光?放射性聯用的體外靶向篩選方法，包括以下步驟：將待檢測藥物結合到固相載體上，加入放射性核素標記的目標分子和熒光探針標記的相同目標分子；形成競爭性結合后同步檢測熒光和放射性信號，獲得可相互驗證的兩組數據結果用于更準確的分析藥物與目標分子的結合能力，從而實現靶向藥物篩選。本發明方法可實現單次試驗同時檢測多個待測藥物的結合熒光和放射性信號強度，迅速高效的篩選出對目標分子具有高特異性結合能力的藥物。可以有效降低假陽性概率，具有高通量、高準確性、操作簡單等特點。可以快速篩選出特異性結合目標分子的抗體藥物，可開發為預靶標抗體用于放射性靶向治療中擴展目標放射性藥物的適應癥。

技術領域

本發明屬于生物標記進行體外靶向篩選技術領域，具體涉及一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法。

背景技術

目前常用針對靶向藥物(如單抗或多肽等)的特異性結合體外靶向活性檢測方法主要是基于化學發光或熒光等信號手段，利用抗原抗體結合進行免疫反應定性和定量分析，達到體外篩選出具有目標靶點靶向活性的藥物目的。

放射性靶向藥物研究中，是將化學發光或熒光信號替換為放射性核素標記所產生的放射性信號。然而各個方法均有一定優缺點，化學發光和熒光方法其靈敏性與放射性信號不一致，并且前兩種方法需要在藥物上進行發光基團或熒光基團修飾，而其修飾后的衍生物性質可能與放射性標記配體修飾的靶向藥物不一致，因此其結果無法直接應用到放射性藥物靶向性判斷中。而放射性標記的篩選技術受限于核素性質與資源供給狀態，對實驗開展的硬件要求也較高，較難開展高通量的快速篩選研究。

基于上述技術現狀，如何開發出一種能同時檢測熒光信號，并且與放射性檢驗結果匹配度高的體外靶向篩選聯合技術，能夠實現更有效的在體外對放射性靶向藥物進行快速篩選，減少后期研發成本，提高藥物研發成功率，成為現階段亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明的目的就是為了解決現有技術存在的問題，而提供一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，本發明方法可以更有效的在體外對放射性靶向藥物進行快速篩選，減少后期研發成本，提高藥物研發成功率。

本發明的目的是提供一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，所述篩選方法包括以下步驟：

(1)將待檢測藥物結合到固相載體上，加入放射性核素標記的目標分子；

(2)向步驟(1)所得物中加入熒光探針標記的相同目標分子；

(3)對步驟(2)所得物進行同步檢測熒光和放射性信號，獲得可相互驗證的兩組數據結果用于更準確的分析藥物與目標分子的結合能力，從而實現靶向藥物篩選。

本發明提供的上述方法，同時利用了熒光及放射性核素來標記目標靶向分子，通過不同濃度梯度的放射性標記目標分子與等濃度的熒光修飾目標分子同時與待測藥物的競爭結合，可實現單次試驗同時檢測多個待測藥物的結合熒光和放射性信號強度，迅速高效的篩選出對目標分子具有高特異性結合能力的藥物。該方法利用多信號數據自洽性可以有效降低假陽性概率，具有高通量、高準確性、操作簡單等特點。利用該方法可以快速篩選出特異性結合目標分子的抗體藥物，可開發為預靶標抗體用于放射性靶向治療中擴展目標放射性藥物的適應癥。

進一步的是，步驟(1)中所述放射性核素標記的目標分子的制備方法為：將目標分子溶解于醋酸鈉緩沖液中，使最終濃度為0.02-20μmol/ml；加入放射性核素0.5-10mCi，42-85℃金屬浴中加熱反應30-60min，即得放射性核素標記的目標靶向分子。

進一步的是，所述醋酸鈉緩沖液的濃度為0.25M，pH為5.5；所述加入的放射性核素比活度為10-1000mCi/ml。

進一步的是，所述放射性核素標記的目標分子包括放射性核素或對應的穩定同位素標記的目標分子，其中，所述穩定同位素與目標分子的反應摩爾比為1:2-10。