[發明專利]一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法

在審

• 申請號: 202011141235.4
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112345766A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 彭述明;楊宇川;錢達志;楊夏;王靜;卓連剛;廖偉;王關全;趙鵬
• 申請（專利權）人: 中國工程物理研究院核物理與化學研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/53;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 成都帝鵬知識產權代理事務所(普通合伙) 51265
• 代理人: 李華

1.一種熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述篩選方法包括以下步驟：

(1)將待檢測藥物結合到固相載體上，加入放射性核素標記的目標分子；

(2)向步驟(1)所得物中加入熒光探針標記的相同目標分子；

(3)對步驟(2)所得物進行同步檢測熒光和放射性信號，獲得可相互驗證的兩組數據結果用于更準確的分析藥物與目標分子的結合能力，從而實現靶向藥物篩選。

2.根據權利要求1所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，步驟(1)中所述放射性核素標記的目標分子的制備方法為：將目標分子溶解于醋酸鈉緩沖液中，使最終濃度為0.02-20μmol/ml；加入放射性核素0.5-10mCi，42-85℃金屬浴中加熱反應30-60min，即得放射性核素標記的目標靶向分子。

3.根據權利要求2所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述醋酸鈉緩沖液的濃度為0.25M，pH為5.5；所述加入的放射性核素比活度為10-1000mCi/ml。

4.根據權利要求2所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述放射性核素標記的目標分子包括放射性核素或對應的穩定同位素標記的目標分子，其中，所述穩定同位素與目標分子的反應摩爾比為1:2-10。

5.根據權利要求1所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述放射性核素包括⁶⁸Ga、¹⁷⁷Lu、¹⁸F[AlF]或⁹⁰Y；所述對應的穩定同位素包括⁶⁹Ga、¹⁷⁵Lu、¹⁹F[AlF]或⁸⁹Y。

6.根據權利要求5所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，步驟(2)中所述熒光探針標記的目標分子的制備方法為：將步驟(1)獲取的穩定同位素標記的目標分子溶于磷酸緩沖液(10mM,pH 7.4)，使最終濃度為0.02-20μmol/ml，加入TCEP和馬來酰亞胺熒光探針，室溫反應2h，超濾或HPLC純化，即得熒光探針標記的帶有穩定同位素的目標靶向分子。

7.根據權利要求6所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液的濃度為10mM，pH為7.4。

8.根據權利要求6所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述熒光探針采用FTSC或Cy5熒光物質進行標記，所述馬來酰亞胺熒光探針包括Alexa Fluor647maleimide、Cy5maleimide或FITC-PEG-maleimide。

9.根據權利要求7所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，步驟(3)中所述同步檢測熒光和放射性信號的方法為：將溶解于磷酸緩沖液(10mM,pH 7.4)的100μL待測藥品(濃度2.5-10μg/ml)加入96孔白板中，4℃過夜孵育，每孔用200μL的含有1％的吐溫-20的磷酸緩沖液(10mM,pH 7.4)清洗3次；每孔加入200μL的3％牛血清蛋白溶液(3g牛血清蛋白溶于100ml磷酸緩沖液(10mM,pH 7.4)，37℃孵育2h；每孔加入25μL步驟(2)的熒光探針標記的目標分子及25μL步驟(1)的放射性核素標記的目標分子；其中熒光分子濃度恒定，放射性核素分子濃度為3倍梯度稀釋的8個以上濃度；將白板37℃孵育1h，上清轉移至透明96孔板后用酶標儀在根據熒光探針類型選擇合適波長檢測熒光強度，每孔白板用于全自動伽馬免疫分析儀檢測放射性CPM值，分別繪制熒光信號及放射性信號的結合曲線，從而實現雙重驗證篩選出對放射性目標分子具有結合能力的待測藥品，并實現半定量分析。

10.根據權利要求1所述的熒光-放射性聯用的體外靶向篩選方法，其特征在于，所述標記的目標分子為生物分子，具體包括多肽或抗體。