[發(fā)明專利]一種SOD融合蛋白脂質(zhì)體與應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011140535.0
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112190698A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉樹滔;周建森
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號: A61K38/44
• 分類號: A61K38/44;A61K9/127;A61K47/64;A61P1/04;A61P29/00;A61P1/00;A23L33/195;A23L29/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學(xué)俊

本發(fā)明公開了一種SOD融合蛋白脂質(zhì)體與應(yīng)用。所述SOD融合蛋白的脂質(zhì)體平均粒徑范圍為100~400 nm，表面電荷范圍在?10~?50mV。SOD融合蛋白的脂質(zhì)體能較好地抵抗胃酶和胰酶的酶解破壞。本發(fā)明涉及的SOD融合蛋白的脂質(zhì)體的原料中，SOD融合蛋白的來源于重組畢赤酵母胞外表達(dá)，酶活力高，純化工藝簡單，易獲得；大豆卵磷脂和膽固醇均屬于食物中常見的化學(xué)成分，來源廣，安全性高。其脂質(zhì)體的制備方法利用逆向蒸發(fā)法。本發(fā)明涉及的SOD融合蛋白脂質(zhì)體有望應(yīng)用于清除腸道自由基，修復(fù)氧化應(yīng)激造成的潰瘍性結(jié)腸炎損傷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品與醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域中的蛋白質(zhì)新劑型和制劑技術(shù)，具體涉及到一種SOD融合蛋白脂質(zhì)體及其在潰瘍性結(jié)腸炎中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）是人體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的核心分子，因為它能夠高效地清除人體內(nèi)最基本的氧自由基——超氧陰離子自由基（O₂·^-）。SOD可于治療由氧自由基異常增高引起的各種疾病，如衰老、輻射病。但SOD臨床應(yīng)用仍受到限制，因為SOD在血液中半衰期短，具有免疫原性，產(chǎn)生致敏性，易酶解失活，貯存過程中不穩(wěn)定等。為克服局限，研究學(xué)者對SOD分子的修飾、改造等方面的技術(shù)雖然已取得了無數(shù)的成果，但是由于天然SOD本身的理化性質(zhì)所限，故改善SOD特性的方法需要進(jìn)一步的研究探索。

氨基酸序列為YGRKKR的短肽富含堿性氨基酸，通過基因工程將YGRKKR短肽與Cu/Zn SOD結(jié)合的SOD融合蛋白（以下簡稱SOD-YR），它比SOD穩(wěn)定并具有更好的細(xì)胞粘附性和跨膜能力。

脂質(zhì)體是由脂雙層膜形成的球形囊泡，主要成分為磷脂和膽固醇。脂雙層膜具有類似于細(xì)胞膜的磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，可將脂溶性藥物包封在脂雙層膜內(nèi)，或?qū)⑺苄运幬锇庠谟H水中心，達(dá)到包埋藥物的目的。由于脂質(zhì)體的成分與細(xì)胞膜相似，脂質(zhì)體更容易被細(xì)胞膜融合和內(nèi)吞。脂質(zhì)體作為藥物載體，具有生物相容性好、安全無毒、免疫原性低、可降解、緩釋控釋等優(yōu)點，能提高藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性、降低毒副作用、提高和延長藥物療效等。因此，脂質(zhì)體被認(rèn)為是提高藥物應(yīng)用性能最成功的載藥系統(tǒng)之一。

脂質(zhì)體的制備方法有很多種。薄膜合成法和逆向蒸發(fā)法是目前較為傳統(tǒng)、應(yīng)用較廣的兩種脂質(zhì)體制備方法。其它方法包括冷凍干燥法、乙醇注射法等等。其中，逆向蒸發(fā)法，基于“反膠束”的形成，適合包封水溶性的藥物，缺點是藥物需要和有機(jī)溶劑直接接觸。SOD-YR是水溶性蛋白質(zhì)，而且具有較好的熱穩(wěn)定性，其酶活力不受乙醚等有機(jī)溶劑的影響，因此更適合采用逆向蒸發(fā)法來制備SOD融合蛋白脂質(zhì)體（SOD-YR脂質(zhì)體）。

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是結(jié)腸的一種慢性特發(fā)性炎癥性腸病，會造成患者腹瀉、便血、腹痛，甚至?xí)M(jìn)一步演變?yōu)榻Y(jié)腸癌，這對人們的生活造成了極大的困擾和負(fù)擔(dān)?；钚匝酰≧OS）是促進(jìn)UC發(fā)生和發(fā)展的重要原因。過量的ROS會造成生物分子（如磷脂、蛋白質(zhì)、核酸等）的氧化損傷，還可以參與多種炎癥反應(yīng)。因此，多種抗氧化劑被用于治療UC（如N-乙酰半胱氨酸、多酚類化合物等）。但是，它們多數(shù)是非特異性的且具有某些副作用，如引起惡心、嘔吐，甚至腎臟損傷等。而超氧化物歧化酶(SOD)是人體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的核心分子，它能夠高效專一地清除人體內(nèi)最基本的ROS——超氧陰離子自由基（O2·-）且未發(fā)現(xiàn)副作用，因此，SOD有望用于UC的治療。SOD-YR中融合YGRKKR短肽可提高SOD的細(xì)胞粘附能力，延長其作用時間。脂質(zhì)體包埋可提高SOD對胃酸、胃蛋白酶的耐受性，因此，口服SOD-YR脂質(zhì)體有望為UC的治療提供新的選擇。