[發明專利]西瓜條帶果皮覆紋特征SNP位點、其dCAPS分子標記、引物及應用

有效

• 申請號: 202011140291.6
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112280883B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 李娜;馬雙武;尚建立;周丹;王吉明;李楠楠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州盈派知識產權代理事務所(普通合伙) 41196
• 代理人: 張曉輝;樊羿

1.一種西瓜條帶果皮覆紋特征SNP標記，其特征在于，其為http://cucurbitgenomics.org/organism/1中所記載的西瓜基因組6號染色體上第25949518位核苷酸由非條帶果皮覆紋特征的G 突變為條帶果皮覆紋特征的A。

2.一種鑒定西瓜條帶果皮覆紋特征的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a. DNA提取：利用CTAB法提取西瓜兩片真葉期葉片總DNA；

b. PCR擴增：

反應體系為：100 ng/μL的西瓜葉片總DNA 1μl、上游引物1μl、下游引物1μl、2×PowerTaq PCR MasterMix 12.5μl、ddH₂O 9.5μl；所述上游引物序列為：5’-TTGAATGGATTAAAAGACCT -3’；所述下游引物序列為：5’-GTTGGTGGACCCAACGACT -3’；

反應程序為：94℃ 5 min，35個循環的94℃ 20 s、55℃ 1 min、72℃ 30 s、72℃ 5min；

c. 酶切反應體系和程序：

反應體系為：PCR產物5μl，HinfI限制性內切酶0.5μl，10×buffer 1.5 μl，ddH₂O 8μl；

反應程序為：65℃恒溫處理10小時；

d. 電泳圖譜分析：對所述酶切產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳、顯影、染色和帶型判讀，找到目標條帶，根據所述擴增產物的條帶大小及位置關系確定所屬基因型，條帶果皮覆紋特征顯示156p的帶型，其它果皮覆紋特征顯示137bp的帶型或者137bp和156bp兩條帶。

3.權利要求1所述SNP標記在鑒定和輔助篩選西瓜果皮覆紋特征育種中的應用。

4.一種鑒定西瓜條帶果皮覆紋特征的試劑盒，包括權利要求2中所述引物、限制性內切酶HinfI。