[發明專利]一種采用本氏煙作為生物反應器制備的輪狀病毒疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011139071.1
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112251461B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 張莉莉;方榮祥;謝傳淼;宋直鈺;霍巖;張玉滿;瞿維歡;劉超仁
• 申請（專利權）人: 植鏈（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C07K14/14;A61K39/15;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發明公開了一種采用本氏煙作為生物反應器制備的輪狀病毒疫苗及其制備方法和應用。本發明提供了一種制備P2?△VP8*蛋白的方法，包括如下步驟：(1)將重組農桿菌甲侵染本生煙植株，培養植株；(2)取植株被侵染的組織，提取總蛋白；(3)從總蛋白中純化得到P2?△VP8*蛋白。本發明還保護P2?△VP8*蛋白，為如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的蛋白質；(a2)序列表的序列3所示的蛋白質。P2?△VP8*蛋白可作為輪狀病毒疫苗。本發明對于輪狀病毒感染的防控具有重大的應用推廣價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種采用本氏煙作為生物反應器制備的輪狀病毒疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

以植物為生物反應器生產人和動物疫苗，是一種正在極速發展的新型生物技術體系。與雞胚、動物細胞、昆蟲細胞體系相比，因其不被動物病原感染的特征，具備很高的生物安全性。植物易于培養和不需無菌操作等特征，使植物產品具備成本低、周期短、易于擴大規模等優勢。

輪狀病毒(Rotavirus)是引起嬰幼兒重癥腹瀉的主要病因，每年造成約幾十萬病例嬰幼兒死亡，接種疫苗是唯一有效的防控手段。通過兩劑以上的免疫程序可獲得持久性保護，避免重癥腹瀉的發生。目前上市的RV疫苗均為口服減毒活疫苗，因其潛在的腸套疊風險，被WHO列為“工藝需要改進的疫苗”。亞單位疫苗由病毒的主要抗原組成并通過注射接種，能有效避免腸套疊的發生。同時亞單位疫苗能實現對流行毒株的精準免疫，應對輪狀病毒的變異。

輪狀病毒主要的中和抗原為VP7(G蛋白)和VP4(P蛋白)，VP4在消化道被胰蛋白酶裂解為VP5*和VP8*兩個片段，其中VP8*亞單位是病毒粒子識別宿主細胞的位點，在不同毒株之間變化很大，是實現精準免疫的主要抗原之一。

發明內容

本發明的目的是提供一種采用本氏煙作為生物反應器制備的輪狀病毒疫苗及其制備方法和應用。

本發明提供了一種制備P2-△VP8*蛋白的方法，包括如下步驟：

(1)將重組農桿菌甲侵染本生煙植株，培養植株；

(2)取植株被侵染的組織，提取總蛋白；

(3)從總蛋白中純化得到P2-△VP8*蛋白。

本發明還提供了一種制備P2-△VP8*蛋白的方法，包括如下步驟：

(1)將重組農桿菌甲和重組農桿菌乙共侵染本生煙植株，培養植株；

(2)取植株被侵染的組織，提取總蛋白；

(3)從總蛋白中純化得到P2-△VP8*蛋白。

本發明還提供了一種制備P2-△VP8*蛋白的方法，包括如下步驟：

采用本生煙植株作為生物反應器，植株葉片被注射重組農桿菌甲，然后培養4-7天，然后取所述葉片提取總蛋白，然后從總蛋白中純化得到P2-△VP8*蛋白。

本發明還提供了一種制備P2-△VP8*蛋白的方法，包括如下步驟：

采用本生煙植株作為生物反應器，植株葉片被注射重組農桿菌甲和重組農桿菌乙，然后培養4-7天，然后取所述葉片提取總蛋白，然后從總蛋白中純化得到P2-△VP8*蛋白。

以上任一所述P2-△VP8*蛋白為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的蛋白質；

(a2)序列表的序列3所示的蛋白質。

重組農桿菌甲是將表達P2-△VP8*基因的質粒導入農桿菌得到的；P2-△VP8*基因編碼P2-△VP8*蛋白。