[發明專利]引物探針組合、檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202011137659.3
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112266978A
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: 史蕾;胡孔新;張麗萍;劉麗娟
• 申請（專利權）人: 深圳國際旅行衛生保健中心(深圳海關口岸門診部);中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 郝文婷

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體涉及一種引物探針組合、檢測試劑盒及其應用。本發明通過設計第一類Y引物和第二類Y引物，且第一類Y引物可以與登革病毒的特異性引物部分互補，第二類Y引物可以與寨卡病毒的特異性引物部分互補，形成“Y”型結構，用于阻止非特異性延伸反應的啟動，以避免因登革病毒和寨卡病毒基因組序列相似性較高而導致的檢測特異性不足的問題，從而提高登革病毒和/或寨卡病毒檢測過程中的特異性和準確性，具有良好的應用前景和市場價值。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體涉及一種引物探針組合，一種檢測試劑盒及其應用，以及一種登革病毒和/或寨卡病毒的檢測方法。

背景技術

登革熱病毒(Dengue virus)屬黃病毒科黃病毒屬，為單正鏈RNA病毒，寨卡病毒(Zika virus)屬黃病毒科黃病毒屬，有包膜，基因組為單股正鏈RNA。

目前，國內外對登革病毒和寨卡病毒的診斷方法，主要是血清學試驗、病毒培養和PCR。其中，血清學試驗、病毒培養具有靈敏度低、免疫交叉反應以及周期長等缺點；現有的登革病毒和寨卡病毒的體外診斷試劑盒大多采用單重RT-PCR反應的方式，面對蟲媒病毒流行季節的大規模樣本檢測時，存在檢測通量低、耗時長的問題。此外，常規的多重實時熒光PCR技術是將PCR技術和多色熒光標記探針相結合的技術，可以在同一個PCR反應管中對多個病毒同時進行快速擴增，大大提高了檢測效率。雖然該方法具有快速、靈敏、自動化程度高等特點，但是對于屬間相似性高的病原體，如用于檢測基因組序列相似性較高的登革病毒和寨卡病毒時，也存在特異性不足、容易出現交叉反應的問題，進而影響試劑盒檢測的特異性和準確性。因此，需要建立一種更加準確、高效的、能夠同時檢測登革病毒和寨卡病毒的雙重檢測方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種引物探針組合，一種檢測試劑盒及其應用，以及一種登革病毒和/或寨卡病毒的檢測方法，旨在解決現有登革病毒和寨卡病毒檢測過程中存在的特異性和準確性較低的技術問題。

為了實現上述發明目的，本發明一方面，提供了一種引物探針組合，其包括第一類引物探針組和第二類引物探針組，所述第一類引物探針組包括登革病毒特異性引物、第一類Y引物和第一類熒光探針，所述第一類Y引物包括第一類第一Y引物、第一類第二Y引物中的至少一種；所述第二類引物探針組包括寨卡病毒特異性引物、第二類Y引物和第二類熒光探針，所述第二類Y引物包括第二類第一Y引物、第二類第二Y引物中的至少一種；

其中，所述登革病毒特異性引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一類第一Y引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一類第二Y引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第一類熒光探針的核苷酸序列為SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述寨卡病毒特異性引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:6-7所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:6-7所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；

所述第二類第一Y引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，或由所述SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列經缺失、插入或替換所得具有相同功能的核苷酸序列；