[發明專利]同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法

有效

• 申請號: 202011137334.5
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112301162B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 何倩;秦培武;于冬梅;董宇涵;陳群;袁曦
• 申請（專利權）人: 清華-伯克利深圳學院籌備辦公室
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6834
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉燚

本發明提供同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法。該病毒核酸檢測方法包括以下步驟：S1：提供Cas12a蛋白、Cas13a蛋白、第一crRNA、第二crRNA和待測核酸樣品的體系；S2：將體系與DNA熒光探針、RNA熒光探針混合反應；S3：對反應前后的熒光信號進行檢測。Cas蛋白在與特異性crRNA形成復合物后，與病毒中靶向的互補DNA鏈或與互補RNA鏈結合進一步形成功能復合體，這些功能復合體的形成會釋放出強大的非特異性剪切核酸單鏈的剪切活性，能夠對DNA熒光探針或RNA熒光進行剪切，改變其熒光發光狀態。通過這兩類Cas蛋白的聯用，實現對DNA病毒及RNA病毒的同時準確高效檢測。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，尤其是涉及同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法。

背景技術

近些年來，由病毒造成的全球事件頻繁發生。非洲豬瘟造成了全球生豬大面積死亡，伊波拉病毒的高度感染性使其在世界各地反復出現，而流感病毒則頻繁地導致大范圍人群及家禽致病。這些病毒傳播途徑簡單、傳播速度快，往往容易引起聚集性爆發事件，導致流行性疫病。針對這些病毒，醫療工作人員目前尚無長期有效的疫苗及治療方法。因此，快速高效的病毒檢測就成為了控制病毒傳播擴散的有力手段。

在進行病原體的檢測時，常常需要針對可能產生相似癥狀的不同種病毒進行檢測以更好地區分。例如，發燒、頭疼、乏力、嗓子疼等癥狀在EB病毒(DNA病毒)以及流感病毒(RNA病毒)造成的感染中都有可能出現，如果不能對其進行準確檢測，可能會耽誤患者的后續治療工作。目前實踐中最常用的病毒檢測方法是聚合酶鏈式反應(Polymerase?chainreaction，PCR)以及由此改進得到的其它檢測方法。這些方法在進行檢測時需要專業的技術人員和大量的血清樣本，耗時較長，反應條件也相對苛刻。如果在面臨上述情況、需要針對不同的DNA病毒和RNA病毒進行檢測時，往往只能分別進行，其原因在于，不同類型的病毒的核酸的特性、長度和復雜程度都有所不同，如果同時對兩類病毒進行檢測可能會因假陽性等原因而使得結果的準確性較差。因此，有必要提供一種準確高效的能夠同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種準確高效的能夠同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法。

第一方面，本發明的一個實施例提供了一種同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法，該病毒核酸檢測方法包括以下步驟：

S1：提供Cas12a蛋白、Cas13a蛋白、第一crRNA、第二crRNA和待測核酸樣品的體系；

S2：將體系與DNA熒光探針、RNA熒光探針混合反應，檢測反應前和反應后的熒光信號；

其中，第一crRNA用于與Cas12a蛋白形成第一復合物，第一復合物特異性識別DNA病毒；第二crRNA用于與Cas13a蛋白形成第二復合物，第二復合物特異性識別RNA病毒。

本發明實施例的病毒核酸檢測方法至少具有如下有益效果：