[發明專利]同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法

有效

• 申請號: 202011137334.5
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112301162B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 何倩;秦培武;于冬梅;董宇涵;陳群;袁曦
• 申請（專利權）人: 清華-伯克利深圳學院籌備辦公室
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6834
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉燚

1.非診斷目的的同時檢測DNA病毒和RNA病毒的病毒核酸檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：提供Cas12a蛋白、Cas13a蛋白、第一crRNA、第二crRNA和待測核酸樣品的體系；

S2：將所述體系與DNA熒光探針、RNA熒光探針混合反應，檢測反應前和反應后的熒光信號，所述DNA熒光探針和所述RNA熒光探針固定于固相載體，所述DNA熒光探針和所述RNA熒光探針上標記的熒光基團的熒光波段不同；

其中，所述第一crRNA用于與所述Cas12a蛋白形成第一復合物，所述第一復合物特異性識別所述DNA病毒；所述第二crRNA用于與所述Cas13a蛋白形成第二復合物，所述第二復合物特異性識別所述RNA病毒；所述體系還包括緩沖液，所述緩沖液以終濃度計，包括如下組分：40～60mM的NaCl、15～25mM的Tris、4～8mM的MgCl₂、50～150μg/mL的BSA，pH為7.3～7.7；所述DNA病毒為EB病毒，所述第一crRNA如SEQ?ID?No.5所示，所述RNA病毒為SARS-CoV-2病毒，所述第二crRNA如SEQ?ID?No.6所示；

其中，所述熒光信號通過全內反射熒光顯微鏡進行檢測，檢測所述熒光信號的方法包括如下步驟：

通過所述全內反射熒光顯微鏡獲取反應前后的圖像；

根據所述圖像提取不同波段的熒光強度；

根據所述熒光強度分析所述待測核酸樣品中所述DNA病毒和所述RNA病毒的濃度，所述固相載體上被剪切的熒光探針數量會隨著目標核酸濃度的增高而增多，導致相應的熒光信號的降低。

2.根據權利要求1所述的病毒核酸檢測方法，其特征在于，采用機器學習技術執行所述分析。

3.根據權利要求2所述的病毒核酸檢測方法，其特征在于，所述機器學習技術為卷積神經網絡。

4.根據權利要求1所述的病毒核酸檢測方法，其特征在于，所述DNA熒光探針和所述RNA熒光探針通過化學修飾的方法固定于所述固相載體。

5.根據權利要求4所述的病毒核酸檢測方法，其特征在于，所述DNA熒光探針和所述RNA熒光探針通過鏈霉親和素-生物素固定于所述固相載體。