[發明專利]一種適用于免疫細胞培養的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011136704.3
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112250891B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 胡秋輝;張軍淼;馬高興;馬寧;仲磊;裴斐;蘇安祥
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: C08J3/075
• 分類號: C08J3/075;C08L89/00;C08L5/00;C08K5/1545;C12N5/078
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明提供了一種適用于免疫細胞培養的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠及其制備方法和應用，涉及凝膠技術領域。本發明所述制備方法，通過對金針菇多糖和大豆蛋白復合凝聚的質量比例、pH和氯化鈉濃度的精準控制，將金針菇多糖和大豆蛋白溶液混合，通過葡萄糖內酯誘導制備出的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠具備更好的持水性，更加完整有序的微觀網絡結構，更低的生物降解速率等特點。同時，本發明制備的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠能提供溫潤多孔的培養外環境，適用于免疫細胞的生長和增殖。

技術領域

本發明屬于凝膠技術領域，具體涉及一種適用于免疫細胞培養的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠及其制備方法和應用。

背景技術

在水溶液中，蛋白質和多糖之間的相互作用主要由帶相反電荷的大分子之間的靜電力(排斥力和吸引力)驅動，分別對應兩大分子之間發生分離和締合作用。由于外界條件(如pH和離子強度)的不同，蛋白質和多糖在水中混合可發生兩種不同類型的相互作用：分離型相分離導致的熱力學不相容性和結合型相分離導致的熱力學相容性。當蛋白質和中性多糖之間沒有結合相互作用或者多糖與蛋白質帶有相似的電荷(陰離子多糖和蛋白質的pH等電點(pI))時，分離狀態占優勢。另一方面，當兩種生物大分子攜帶相反的電荷時，通常會發生由蛋白質和多糖之間的靜電結合相互作用誘導的熱力學相容性。這些相互作用發生在蛋白質的pI和多糖的pKa之間。在這些條件下，根據制備條件，可以形成不同類型的結構，包括凝聚物，復合物和凝膠。蛋白和多糖的靜電相互作用受到多種因素的影響，如鹽離子濃度、蛋白和多糖所帶電荷數、蛋白和多糖的比例。因此這些因素決定了相互作用的方式和強度。探究這些因素對蛋白和多糖的相互作用的影響可以更好的利用天然蛋白和多糖的功能開發。

凝膠具有多孔性和良好的持水性，這些特點使得凝膠能夠為細胞的培養提供良好的透氣溫潤生長環境。針對這一點，近年來凝膠在醫療的應用和產品的開發得到飛速發展，例如凝膠創可貼的出現，就是利用凝膠的持水性搭載可治療創傷的藥物，同時凝膠還可以隔絕細菌與創口的接觸，多孔溫潤的環境為細胞提供了多水透氣的生長環境。但是現有的凝膠制備在原料和方法上存在成膠能力差，持水力弱，藥物搭載率低等缺點。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種適用于免疫細胞培養的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠及其制備方法和應用，利用所述制備方法制備得到的金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠具有良好的持水性和結構的有序完整性，可將其應用于生物降解和細胞培養。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠的制備方法，包括以下步驟：(1)將大豆蛋白的水溶液和金針菇多糖的水溶液混合，調節pH值為4.5～6，添加NaCl至濃度為10～15mmol/L，得多糖/蛋白質的混合溶液；所述多糖/蛋白質的混合溶液中大豆蛋白和金針菇多糖的質量比為10:1～15:1；

(2)將所述多糖/蛋白質的混合溶液于85～90℃加熱20～25min，得蛋白質/多糖熱聚體；

(3)將所述蛋白質/多糖熱聚體與葡萄糖內酯混合、攪拌，流動水快速降溫，冷卻后于4℃環境中靜置8～12h，得所述金針菇多糖/大豆蛋白復合凝膠。

優選的，步驟(1)中大豆蛋白的水溶液中大豆蛋白的質量體積濃度為8～10％；金針菇多糖的水溶液中的金針菇多糖的質量體積濃度為3～5％。

優選的，步驟(1)中大豆蛋白的水溶液中大豆蛋白的質量體積濃度為8.5～9.5％；金針菇多糖的水溶液中的金針菇多糖的質量體積濃度為3.5～4.5％。

優選的，步驟(1)中多糖/蛋白質的混合溶液中大豆蛋白和金針菇多糖的總質量體積濃度為6～8％。

優選的，步驟(3)中葡萄糖內酯的質量為所述蛋白質/多糖熱聚體質量的3～6％。

優選的，步驟3)中所述攪拌為磁力攪拌，轉速為200rpm，時間為1～2min。