[發明專利]一種禽畜糞便發酵菌劑的篩選方法

在審

• 申請號: 202011135489.5
• 申請日: 2020-10-22
• 公開（公告）號: CN112251357A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 鄭強;肖建中;丁楓華;張東旭;游張平;黃健;徐飛;張曉青;曾玉榮
• 申請（專利權）人: 麗水學院
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/14;C12R1/68
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 吳斌林

一種禽畜糞便發酵菌劑的篩選方法，其菌種獲得的步驟如下：1、選取落葉覆蓋富含腐殖質的土壤表面區域，撥開落葉表面，在其區域內挖深度25?35cm，長度55?65cm，寬度25?35cm的小坑，裝入塑料盆，再將新鮮豬糞傾倒入塑料盆中，坑口用塑料薄膜密封，在塑料薄膜處撒上枯枝或落葉，富集6?8天；2、步驟1后，稱取8?12g豬糞混合液加入85?95mL無菌水，振蕩25?35min；3、步驟2后，對振蕩均勻后的豬糞懸液進行不同梯度稀釋，得到不同梯度稀釋的豬糞溶液；4、步驟3后，吸取各個稀釋濃度的豬糞溶液200μL分別涂布在高氏一號固體培養基、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基和沙氏瓊脂培養基上，置于25?30℃的恒溫培養箱中培養60?72h，最后選擇形態不同且長勢優良的菌落進行分離純化形成單菌落。

技術領域

本發明涉及微生物發酵技術領域，尤其涉及一種禽畜糞便發酵菌劑的篩選方法。

背景技術

我國是禽畜養殖大國，也是世界上禽畜糞便產出量最大的國家，且以豬糞、牛糞和雞糞為主。隨著人民生活水平的提高，人民對豬肉及其肉制品需求量不斷提高，因此養殖規模也在不斷擴大，同時導致豬糞的產量也隨之增大。但是在目前規模化的養豬場大部分都沒有配套相對應的糞污處理設施，再加上禽畜糞便處理不當會造成嚴重的環境污染問題。

目前，使用的禽畜糞便處理方法有化學處理法、物理處理法與微生物發酵法等。化學處理法雖然對豬糞的除臭與分解效率高，但設備運行及維護成本高昂，養殖戶難以承受；物理處理法則存在前期投入成本巨大、處理效率較低、易造成二次污染等缺點。

而現階段生物發酵法的發酵床菌劑主要采用以日本洛東為代表的進口菌劑產品，運行成本高，養殖戶難以承擔；而目前國內自主培育的菌劑商品化程度不高，且普遍表現出除臭不徹底、豬糞腐熟緩慢等缺點，從而導致發酵床的處理容量低、處理周期長、難以實現零污染排放。

發明內容

本發明要解決上述現有技術存在的問題，提供了一種豬糞發酵煙曲霉的篩選與應用，選取麗水市白云山落葉覆蓋富含腐殖質的土壤表面區域，經菌種篩選和酶化測定，以煙曲霉菌菌株為原料制發酵菌劑，解決了本土菌劑產品所遇的上述問題。

本發明解決其技術問題采用的技術方案：這種禽畜糞便發酵菌劑的篩選方法，其主要包括菌種獲得和菌種篩選，

其菌種獲得的步驟如下：

步驟1、選取落葉覆蓋富含腐殖質的土壤表面區域，撥開落葉表面，在其區域內挖深度25-35cm，長度55-65cm，寬度25-35cm的小坑，裝入塑料盆，再將新鮮豬糞傾倒入塑料盆中，坑口用塑料薄膜密封，在塑料薄膜處撒上枯枝或落葉，富集6-8天，形成豬糞混合液；

步驟2、步驟1后，稱取8-12g豬糞混合液加入85-95mL無菌水，振蕩25-35min，得到豬糞懸液；

步驟3、步驟2后，對振蕩均勻后的豬糞懸液進行不同梯度稀釋，得到不同梯度稀釋的豬糞溶液；

步驟4、步驟3后，吸取各個稀釋濃度的豬糞溶液200μL分別涂布在高氏一號固體培養基、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基和沙氏瓊脂培養基上，置于25-30℃的恒溫培養箱中培養60-72h，最后選擇形態不同且長勢優良的菌落進行分離純化形成單菌落。

其菌種篩選的步驟如下：

步驟1、將菌種獲得中的步驟4分離得到的單菌落接種到氨選擇培養基瓊脂平板或搖瓶內，利用氨氣的菌株均會長菌或渾濁，與不長菌、空白組存在明顯的差異，挑選出能夠利用氨水作為唯一氮源生長的菌株；

步驟2、將步驟1中篩選出的菌株以10％的接種量接種后放置在20-30℃環境中，以150r/min搖床培養6-8天，培養完成后根據氨氮的降解率公式計算氨氮降解率；