[發明專利]用于青花菜種質資源和品種鑒定的SNP標記組合及應用

有效

• 申請號: 202011134983.X
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112280881B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 沈鈺森;王建升;顧宏輝;虞慧芳;趙振卿;盛小光
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

1.用于擴增SNP標記的KASP引物組合，其特征在于，包含Bol.ita04和Bol.ita15的引物組合；

。

2.含有權利要求1的KASP引物的檢測試劑、試劑盒或芯片。

3.權利要求1所述KASP引物的以下應用，其特征在于：

用于青花菜雜交種‘綠雄90’品種純度鑒定。

4.如權利要求3所述KASP引物的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測青花菜基因組DNA；

2)向步驟1)提取的DNA模板中加入特異的KASPPrimermix和通用的KASP?Mastermix，進行PCR擴增；

3)采用熒光檢測儀分析PCR擴增產物。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，KASPPrimermix中含有三條特異性引物：正向引物1、正向引物2和反向引物，分別對應FAM、Hex和Common；所述KASPMastermix包含如下各組分：通用的FRETcassette熒光引物，ROX內參染料，KlearTaqDNA聚合酶，dNTP和MgCl₂；步驟2)中引物F的5’端添加FAM熒光標簽序列5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’，引物H的5’端添加HEX熒光標簽序列5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于，PCR的反應體系為：PCR預混液5μL；引物混合液0.14μL；其中各引物的終濃度均為5nM；20ng/μL模板DNA5μL。

7.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述PCR的反應條件為：90-95℃預變性10-20min；第一步擴增反應，90-95℃變性10-30s，61-55℃退火延伸30-90s，每個循環的退火溫度降低0.2-1℃，共10個循環；第二步擴增反應，90-95℃變性10-30s，53-57℃退火延伸30-90s，共20-35個循環。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述PCR的反應條件為：94℃預變性15min；第一步擴增反應，94℃變性20s，61-55℃退火延伸60s，每個循環的退火溫度降低0.6℃，共10個循環；第二步擴增反應，94℃變性20s，55℃退火延伸60s，共26個循環。