[發明專利]一種獸藥黃梔花口服液中氟苯尼考含量的測定方法

有效

• 申請號: 202011133777.7
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112345661B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 張萌萌;李宗進;姬桂花;郭超暉;李震;杜志毅;王璐
• 申請（專利權）人: 北京精益捷檢測科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 侯巍巍

1.一種獸藥黃梔花口服液中氟苯尼考含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、取均質樣品2.5 g的獸藥黃梔花口服液和2.5 mL的水，將2.5 g獸藥黃梔花口服液溶解于2.5 mL水中，得到待測樣液A；

S2、于待測樣液A中加入10 mL的乙酸乙酯充分混勻，振蕩10 min，然后在離心機上進行離心處理，所采用的轉速為4000 r/min，時間為10 min，得到上清液A，再將上清液A轉移到50 mL的離心管中；

于殘渣A中再次加入10 mL乙酸乙酯進行重復提取一次，得到上清液B，將上清液A和上清液B合并到同一50 mL的離心管中得到上清液C，將上清液C于45 ℃的氮吹儀下吹干，除去上清液C中的乙酸乙酯，并得到殘渣B；

S3、于上述步驟中獲得的殘渣B中加入4 mL 5 %的甲醇水溶液得到復溶溶液A，再向復溶溶液A中加入4 mL經5 %甲醇水溶液飽和的正己烷除脂，充分混勻，在離心機上進行離心，所采用的轉速為4000 r/min，時間為5 min；

再加入正己烷充分混勻，隨后3000-5000 r/min的轉速下離心2-8 min，去除上層正己烷，重復除脂一次，獲得備用液；

S4、采用C18固相萃取柱對備用液進行萃取，取固相萃取柱依次用3 mL甲醇、3mL水進行活化，完成潤洗固相萃取柱的過程，取全部備用液過柱，完成凈化過程；備用液過柱完成后，用3 mL水淋洗，3 mL水活化，收集洗脫液，將洗脫液于45 ℃的氮吹儀下吹干，得到殘渣C；

S5、于殘渣C加入1 mL水復溶，得到復溶溶液B，渦旋混勻，隨后將其全部轉移至1.5 mL的離心管中，進行離心，所選離心轉速為12000 r/min、時間為6 min，最后過0.22 μm的微濾膜，得到上清液D；將上清液D過濾后進行液相色譜-串聯質譜儀檢測，在進行液相檢測時，所選用的色譜柱為C18柱，2.1*50 mm、1.7 μm，其中液相色譜使用的流動相A為乙腈，流動相B為水； 質譜條件為：采用負離子電離，離子對為356.15＞185.2，錐孔電壓為30V，碰撞氣能量為22V，離子對為356.15＞336.15，錐孔電壓為30V，碰撞氣能量為16V；

或，

S1、取均質樣品3 g的獸藥黃梔花口服液和2.5 mL的水，將2.5 g獸藥黃梔花口服液溶解于2.5 mL水中，得到待測樣液A；

S2、于待測樣液A中加入15 mL的乙酸乙酯充分混勻，振蕩20 min，隨后進行離心處理，所選用的轉速為5000 r/min，離心時間為5 min，離心處理完后將得到的上清液A轉移到50mL的離心管中；

于殘渣A中加入15 mL的乙酸乙酯進行重復提取，得到上清液B，將上清液A和上清液B合并到同一離心管中，得到上清液C，最后將上清液C于45 ℃氮吹儀下進行吹干，得到殘渣B；

S3、于上述步驟所獲得的殘渣B中加入6.25 mL5 %的甲醇水溶液得到復溶溶液A，再向復溶溶液A中加入6.25 mL經5 %甲醇水溶液飽和的正己烷，充分混勻，在離心機上進行離心，所采用的轉速為5000 r/min，時間為2 min，以便除去復溶溶液A中的正己烷，減少雜質對檢測結果的影響；重復除脂一次，得到備用液；

S4、采用C18固相萃取柱進行萃取過程，取固相萃取柱依次用3 mL甲醇、3 mL水進行活化，完成潤洗固相萃取柱的過程，取全部備用液過柱，完成凈化過程；備用液過柱完成后，用3 mL水淋洗，3 mL水活化，收集洗脫液，將洗脫液于45 ℃的氮吹儀下吹干，得到殘渣C；

S5、于殘渣C加入1 mL水復溶，得到復溶溶液B，渦旋混勻，隨后將其全部轉移至1.5 mL的離心管中，進行離心，所選離心轉速為15000 r/min、時間為5 min，最后過0.22 μm的微濾膜，得到上清液D；將上清液D過濾后進行液相色譜-串聯質譜儀檢測；

在進行液相檢測時，所選用的色譜柱為C18柱，2.1*50 mm、1.7 μm，其中液相色譜使用的流動相A為乙腈，流動相B為水； 質譜條件為：采用負離子電離，離子對為356.15＞185.2，錐孔電壓為30V，碰撞氣能量為22V，離子對為356.15＞336.15，錐孔電壓為30V，碰撞氣能量為16V。