[發(fā)明專利]巨噬細胞分離用組合試劑及其應用

有效

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• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112239745B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 張瀚文;張萊;丁鑫;彭聰;楊亞青;柏惠;陳希辰;陳琪
• 申請（專利權）人: 南京醫(yī)科大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

巨噬細胞分離用組合試劑及其應用，包括：心臟消化液A（A液）:0.02g?0.05g Ⅱ型膠原酶，0.01g Ⅳ型膠原酶，0.02g?0.05g BSA加入50mL PBS緩沖液中；緩沖液B（B液）:無鈣鎂HBSS緩沖液中加入1 wt.%?3wt.%的血清。本發(fā)明提出的心臟消化分離方法可以降低心臟中巨噬細胞的死亡率，明顯提高由心臟中分離的巨噬細胞活性，更好的保留巨噬細胞中的表面標記物，避免傳統(tǒng)消化方法導致的小鼠心臟中分離的巨噬細胞中表面標記物F4/80的丟失。本發(fā)明所使用材料易得并且毒副作用小，分離心臟中細胞的消化操作方法簡易行，減少實驗負擔。

技術領域

本發(fā)明屬于細胞分離技術領域，具體涉及一種有效消化分離心臟組織細胞，從而高效分離出心臟組織中巨噬細胞的細胞分離提取方法。

背景技術

巨噬細胞是由Ilya Ilyich Mechnikov在1882年首次發(fā)現(xiàn)，并被認為是脊椎動物抵抗損傷感染的第一道防線。隨著科學技術的不斷發(fā)展人們對巨噬細胞的認知更加全面，例如基因圖譜以及譜系示蹤技術的出現(xiàn)使我們更清楚的認識了巨噬細胞的生理學以及病理生理學功能。眾所周知，巨噬細胞存在于所有組織器官中，除腸道與皮膚組織中的巨噬細胞是僅靠外源的單核細胞補充外，其他組織中的巨噬細胞既可以從外源單核細胞中補充又可自我增殖維持組織中巨噬細胞數(shù)量。當感染與損傷發(fā)生時，循環(huán)的單核細胞會迅速的募集到發(fā)炎組織分化為巨噬細胞，并成為組織中急性炎癥反應階段的主要細胞群落。此外，不同組織中的巨噬細胞具有不同的生理學功能，例如皮膚中的巨噬細胞參與調節(jié)細胞內(nèi)外的鹽水平衡；脂肪組織中的巨噬細胞可以產(chǎn)生兒茶酚胺從而維持脂肪產(chǎn)熱，并且還可參與胰島素抵抗；肝臟中的巨噬細胞涉及紅細胞的轉移以及鐵循環(huán)等作用。

近年來，在心血管領域研究中人們發(fā)現(xiàn)巨噬細胞在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起到了至關重要的作用。在胚胎發(fā)育初期，巨噬細胞就已存在于心臟組織中，并在心臟發(fā)育與成熟階段起到了免疫監(jiān)控以及維持心臟組織中各類細胞自我平衡的作用。在健康人心臟中的巨噬細胞主要起到了清理衰老以及死亡細胞的功能，并且協(xié)助心臟組織中的電信號傳導。然而在衰老的心臟組織中，心臟中的巨噬細胞的功能卻發(fā)生改變，分化為促炎型巨噬細胞，并引起心臟中的炎癥反應。并且在眾多心臟疾病中，巨噬細胞同樣起到至關重要的作用。在心肌梗死時，巨噬細胞可以通過在心肌梗死發(fā)生發(fā)展不同階段的炎癥調節(jié)效應從而幫助心臟組織的修復以及改善心臟功能。

如今，越來越多的學者已經(jīng)投身于心臟巨噬細胞的相關研究中，而隨著心臟中巨噬細胞在心臟疾病中的相關研究的深入，心臟中的巨噬細胞分離與檢測的需求也日漸增加。但目前分離心臟中巨噬細胞仍沒有特別有效的方法，因此尋找一種有效分離心臟中巨噬細胞的方法顯的尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術問題：為了解決心臟中巨噬細胞難以提取，以及提取活性低，數(shù)量少這一技術問題，本發(fā)明提供一種分離心臟中巨噬細胞的方法，可以有效保留心臟中巨噬細胞的細胞活性，增加心臟中巨噬細胞的分離效率，有利于研究人員分離小鼠心臟中的巨噬細胞進行科學研究，尤其可以提高分離出的心臟中巨噬細胞的分離效率，可以很好的保留巨噬細胞中特異性蛋白活性，促進分離巨噬細胞表面marker完美保留，使流式細胞術分選效果更加明顯。

技術方案：一種巨噬細胞分離用組合試劑，包括：心臟消化液A（A液）: 0.02g-0.05g Ⅱ型膠原酶，0.01g Ⅳ型膠原酶，0.02g-0.05g BSA加入50mL PBS緩沖液中；緩沖液B（B液）: 無鈣鎂HBSS緩沖液中加入1 wt.%-3wt.%的血清。

優(yōu)選的具體組成為：心臟消化液A（A液）: 0.03g Ⅱ型膠原酶，0.01g Ⅳ型膠原酶，0.03g BSA加入50mL PBS緩沖液中；緩沖液B（B液）: 無鈣鎂HBSS緩沖液中加入2wt.%的血清。