[發(fā)明專利]一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態(tài)性選育方法及引物和試劑盒

在審

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• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112195266A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設計）人: 鄭小海;張桂粉;陳恒;黨宏濤;王娟;張川;王新智
• 申請（專利權(quán)）人: 西京學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

本發(fā)明公開了一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態(tài)性選育方法及引物和試劑盒，該方法包含：以待測獼猴桃的基因組DNA為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物，進行PCR反應，根據(jù)PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷待測獼猴桃的變異多態(tài)性：若PCR擴增產(chǎn)物與對照相比特異條帶大于或等于1條，同時擴增條帶大于或等于7條，則該枝條、種苗或果實為具有豐富變異多態(tài)性；如果PCR擴增產(chǎn)物與對照相比無特異條帶，且小于7條擴增條帶，則枝條、種苗或果實為非變異多態(tài)性枝條。本發(fā)明的方法提高了獼猴桃育種和篩選效率，縮短育種年限。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種多態(tài)性選育方法，具體涉及一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態(tài)性選育方法及引物和試劑盒。

背景技術(shù)

獼猴桃是獼猴桃科獼猴桃屬藤本果樹，被譽為“水果之王”，酸甜可口，營養(yǎng)豐富。我國是獼猴桃屬植物的原始起源中心和分布中心，擁有豐富的獼猴桃種質(zhì)資源。全世界共發(fā)現(xiàn)66個獼猴桃種，約118個種下分類單元(變種，變型)，其中有62個種原產(chǎn)于我國。盡管我國獼猴桃種質(zhì)資源蘊藏豐富，但獼猴桃品種的開發(fā)和利用發(fā)展緩慢。我國獼猴桃產(chǎn)業(yè)較新西蘭起步晚，近年來雖有了迅猛的發(fā)展，但新品種的果實品質(zhì)，耐貯性和抗逆性還有待改進。目前，我國的主要栽培種有海沃德、徐香、紅陽、翠香、秦美、亞特、華美 2號、華光系列等，還有許多野生種，其中海沃德是新西蘭引進的品種，其他是我國培育的品種，與國外品種相比較，我國的品種規(guī)模化種植水平較低，果實貯藏性和品種抗病蟲能力不足。因此，通過常規(guī)技術(shù)與現(xiàn)代育種技術(shù)相結(jié)合，培育市場競爭力強的世界性新品種，對我國獼猴桃產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

由于獼猴桃是雌雄異株，并且自然雜交明顯，利用常規(guī)的手段對其進行譜系分析、品種鑒定以及遺傳多樣性分析等存在一定的困難。獼猴桃屬植物一般形態(tài)接近，傳統(tǒng)方法存在主觀的判斷因素，且形態(tài)分類方法受到時間和空間的限制，對專業(yè)人員要求高，鑒別難度大，精確度低。因此學者們分別利用RAPD、SSR、SRAP、SCoT等分子標記手段對不同獼猴桃的遺傳多樣性進行了分析，并建立了相關(guān)的指紋圖譜。

在近年來出現(xiàn)的眾多的DNA指紋圖譜技術(shù)中，隨機擴增多態(tài)性DNA技術(shù)(RAPD)由于其簡便、快速、有效等優(yōu)點，克服了其他分子標記技術(shù)鑒別費用高，重復性差等缺點，已廣泛應用于動、植物的遺傳多樣性研究中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態(tài)性選育方法及引物和試劑盒，提高了獼猴桃育種和篩選效率，縮短了育種年限。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態(tài)性選育方法，該方法包含：以待測獼猴桃的基因組DNA為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物，進行PCR反應，根據(jù)PCR擴增產(chǎn)物和對照的瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷待測獼猴桃的變異多態(tài)性：若PCR擴增產(chǎn)物與對照相比特異條帶大于或等于1條，同時擴增條帶大于或等于7條，則該枝條、種苗或果實為具有豐富變異多態(tài)性；如果PCR擴增產(chǎn)物與對照相比無特異條帶，且小于7條擴增條帶，則枝條、種苗或果實為非變異多態(tài)性枝條；其中，所述對照為以親本的基因組DNA 作為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物經(jīng)PCR反應擴增得到的產(chǎn)物。

優(yōu)選地，所述PCR反應的擴增體系為包含：MgCl₂、dNTPs、Taq酶、模板、10×ReactionBuffer、所述引物和dd H₂O。

優(yōu)選地，所述PCR反應的擴增體系為包含：MgCl₂2.5 mmol/L、dNTPs 150μmol/L、Taq酶0.8U、模板40ng、10×Reaction Buffer 2μL、引物 0.3μmol/L，用dd H₂O將總體積補至20μL。