[發明專利]一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態性選育方法及引物和試劑盒

在審

• 申請號: 202011133430.2
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112195266A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 鄭小海;張桂粉;陳恒;黨宏濤;王娟;張川;王新智
• 申請（專利權）人: 西京學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

本發明公開了一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態性選育方法及引物和試劑盒，該方法包含：以待測獼猴桃的基因組DNA為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物，進行PCR反應，根據PCR擴增產物的瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷待測獼猴桃的變異多態性：若PCR擴增產物與對照相比特異條帶大于或等于1條，同時擴增條帶大于或等于7條，則該枝條、種苗或果實為具有豐富變異多態性；如果PCR擴增產物與對照相比無特異條帶，且小于7條擴增條帶，則枝條、種苗或果實為非變異多態性枝條。本發明的方法提高了獼猴桃育種和篩選效率，縮短育種年限。

技術領域

本發明涉及一種多態性選育方法，具體涉及一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態性選育方法及引物和試劑盒。

背景技術

獼猴桃是獼猴桃科獼猴桃屬藤本果樹，被譽為“水果之王”，酸甜可口，營養豐富。我國是獼猴桃屬植物的原始起源中心和分布中心，擁有豐富的獼猴桃種質資源。全世界共發現66個獼猴桃種，約118個種下分類單元(變種，變型)，其中有62個種原產于我國。盡管我國獼猴桃種質資源蘊藏豐富，但獼猴桃品種的開發和利用發展緩慢。我國獼猴桃產業較新西蘭起步晚，近年來雖有了迅猛的發展，但新品種的果實品質，耐貯性和抗逆性還有待改進。目前，我國的主要栽培種有海沃德、徐香、紅陽、翠香、秦美、亞特、華美 2號、華光系列等，還有許多野生種，其中海沃德是新西蘭引進的品種，其他是我國培育的品種，與國外品種相比較，我國的品種規模化種植水平較低，果實貯藏性和品種抗病蟲能力不足。因此，通過常規技術與現代育種技術相結合，培育市場競爭力強的世界性新品種，對我國獼猴桃產業的持續發展具有重要意義。

由于獼猴桃是雌雄異株，并且自然雜交明顯，利用常規的手段對其進行譜系分析、品種鑒定以及遺傳多樣性分析等存在一定的困難。獼猴桃屬植物一般形態接近，傳統方法存在主觀的判斷因素，且形態分類方法受到時間和空間的限制，對專業人員要求高，鑒別難度大，精確度低。因此學者們分別利用RAPD、SSR、SRAP、SCoT等分子標記手段對不同獼猴桃的遺傳多樣性進行了分析，并建立了相關的指紋圖譜。

在近年來出現的眾多的DNA指紋圖譜技術中，隨機擴增多態性DNA技術(RAPD)由于其簡便、快速、有效等優點，克服了其他分子標記技術鑒別費用高，重復性差等缺點，已廣泛應用于動、植物的遺傳多樣性研究中。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態性選育方法及引物和試劑盒，提高了獼猴桃育種和篩選效率，縮短了育種年限。

為了達到上述目的，本發明提供了一種用于獼猴桃的RAPD分子標記多態性選育方法，該方法包含：以待測獼猴桃的基因組DNA為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物，進行PCR反應，根據PCR擴增產物和對照的瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷待測獼猴桃的變異多態性：若PCR擴增產物與對照相比特異條帶大于或等于1條，同時擴增條帶大于或等于7條，則該枝條、種苗或果實為具有豐富變異多態性；如果PCR擴增產物與對照相比無特異條帶，且小于7條擴增條帶，則枝條、種苗或果實為非變異多態性枝條；其中，所述對照為以親本的基因組DNA 作為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物經PCR反應擴增得到的產物。

優選地，所述PCR反應的擴增體系為包含：MgCl₂、dNTPs、Taq酶、模板、10×ReactionBuffer、所述引物和dd H₂O。

優選地，所述PCR反應的擴增體系為包含：MgCl₂2.5 mmol/L、dNTPs 150μmol/L、Taq酶0.8U、模板40ng、10×Reaction Buffer 2μL、引物 0.3μmol/L，用dd H₂O將總體積補至20μL。