[發(fā)明專利]一種用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育方法及引物和試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011133430.2 | 申請日： | 2020-10-21 |
| 公開（公告）號： | CN112195266A | 公開（公告）日： | 2021-01-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鄭小海;張桂粉;陳恒;黨宏濤;王娟;張川;王新智 | 申請（專利權(quán)）人： | 西京學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;A01H1/04 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246 | 代理人： | 龔燮英 |
| 地址： | 710100 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 獼猴桃 rapd 分子 標(biāo)記 多態(tài)性 選育 方法 引物 試劑盒 | ||
1.一種用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育方法，其特征在于，該方法包含：
以待測獼猴桃的基因組DNA為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQID.NO2所示的核苷酸序列為引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，根據(jù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和對照的瓊脂糖凝膠電泳條帶判斷待測獼猴桃的變異多態(tài)性：
若PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與對照相比特異條帶大于或等于1條，同時擴(kuò)增條帶大于或等于7條，則該枝條、種苗或果實(shí)為具有豐富變異多態(tài)性；如果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與對照相比無特異條帶，且小于7條擴(kuò)增條帶，則枝條、種苗或果實(shí)為非變異多態(tài)性枝條；
其中，所述對照為以親本的基因組DNA作為模板，以如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列為引物經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增得到的產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)的擴(kuò)增體系為包含：MgCl2、dNTPs、Taq酶、模板、10×ReactionBuffer、所述引物和dd H2O。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)的擴(kuò)增體系為包含：MgCl22.5 mmol/L、d NTPs 150μmol/L、Taq酶0.8U、模板40ng、5×Reaction Buffer 4μL、引物0.3μmol/L，用dd H2O將總體積補(bǔ)至20μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)的擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min；94℃變性2min，36℃退火1min，72℃延伸2min，34個循環(huán)；72℃10min；4℃保存。
5.一種用于獼猴桃的RAPD-PCR擴(kuò)增的引物，其特征在于，該引物包含：如SEQ ID.NO1所示的核苷酸序列或如SEQ ID.NO2所示的核苷酸序列。
6.一種用于獼猴桃的RAPD分子標(biāo)記多態(tài)性選育的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中的引物采用如權(quán)利要求5所述的用于獼猴桃的RAPD-PCR擴(kuò)增的引物。
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