[發明專利]一種番瀉苷A的純化方法和應用

在審

• 申請號: 202011131069.X
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112225765A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 劉福德;王藝瑋;孫永躍;杜翠榮;趙寧;彭嬌嬌
• 申請（專利權）人: 天津理工大學
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H15/244
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

1.一種番瀉苷A的純化方法，其特征在于：步驟如下：

將番瀉葉制成中粉，加入5-10倍體積乙醇溶液，水浴加熱提取，提取液減壓旋蒸回收乙醇后，凍干成粉末；取凍干粉末，高純水重新溶解定容后，加入大孔吸附樹脂柱，進行動態吸附，動態吸附結束后，先用水洗至無色，后用5-8BV40-60％乙醇溶液洗脫有效成分，收集洗脫液，用高效液相色譜法監測洗脫液中番瀉苷A的含量，合并番瀉苷A含量高于50％的洗脫流分，減壓旋蒸回收有機溶劑，凍干成粉末；干法上樣，加入到硅膠柱頂端，氯仿甲醇梯度洗脫，用高效液相色譜法監測洗脫液中番瀉苷A的含量，合并番瀉苷A含量高于80％的洗脫流分，減壓旋蒸回收有機溶劑，凍干成粉末即得番瀉苷A柱層析產品。

2.根據權利要求1所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：具體步驟如下：

⑴番瀉苷A的提?。壕芊Q取番瀉葉中粉，該中粉為65目-80目，加入5-10倍體積乙醇溶液，水浴加熱提取，減壓過濾，過濾壓力為0.5-2.0MPa，除去殘渣，得提取液；同法提取2-5次，合并提取液；提取液經減壓濃縮，濃縮溫度為30-60℃，濃縮壓力為0.5-2.0MPa，回收有機溶劑后，冷凍干燥成粉末；

⑵大孔吸附樹脂吸附：在玻璃柱中加入乙醇，后將大孔吸附樹脂倒入，再加入乙醇，直至乙醇的高度高于樹脂層，浸泡；然后，放凈洗滌液，用同樣的方法反復醇洗，直至試管中的洗滌液加入3-5倍質量的水，不顯渾濁時為止；最后用清水充分洗滌，至洗滌液無醇味；取步驟⑴得到的冷凍干燥的粉末，高純水溶解、定容，每2g-5g凍干粉末定容至1L-2.5L，后加入大孔吸附樹脂柱，進行動態吸附，動態吸附結束后，先用水洗至無色后，再用40％-60％乙醇溶液洗脫有效成分，每2g-5g凍干粉末使用1.2L-3L40％-60％乙醇溶液洗，收集洗脫液，用高效液相色譜法監測洗脫液中番瀉苷A的含量，合并番瀉苷A含量高于50％的洗脫流分，減壓濃縮，濃縮溫度為30-60℃，濃縮壓力為0.5-2.0MPa，回收有機溶劑后，冷凍干燥成粉末；

⑶洗脫液的配制：配置洗脫液A：純氯仿，洗脫液B：體積比為1：9的甲醇和氯仿的混合液，洗脫液C：體積比為2：8的甲醇和氯仿的混合液，洗脫液D：體積比為3：7的甲醇和氯仿的混合液，洗脫液E：體積比為4：6的甲醇和氯仿的混合液，洗脫液F：體積比為5：5的甲醇和氯仿的混合液；洗脫液G：體積比為6：4的甲醇和氯仿的混合液；洗脫液H：體積比為7：3的甲醇和氯仿的混合液；

⑷裝柱與上樣：稱取硅膠，濕法進行裝柱，由洗脫液A平衡硅膠柱后，采用干法上樣，于通風櫥中將硅膠與番瀉苷A樣品混合均勻、充分干燥；

⑸洗脫：分別用B液、C液、D液、E液、F液、G液、H液梯度洗脫，收集洗脫液，由高效液相色譜法監測洗脫液中番瀉苷A的含量；

⑹合并番瀉苷A含量高于80％的洗脫流分，減壓濃縮，濃縮溫度為30-60℃，濃縮壓力為0.5-2.0MPa，回收有機溶劑后，冷凍干燥成粉末，即得番瀉苷A柱層析產品。

3.根據權利要求2所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：所述步驟⑴中水浴提取條件為：乙醇溶液為40％-70％的乙醇溶液，提取溫度30-50℃，提取時間0.5-1小時。

4.根據權利要求2所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：所述步驟⑵中樹脂層的高度為柱高的40％-60％。加入乙醇的高度高于樹脂層20cm-40cm，浸泡時間為12-24小時。

5.根據權利要求2所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：所述步驟⑵中大孔吸附樹脂為比表面積為480-520m²/g的樹脂。

6.根據權利要求2所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：所述步驟⑷中硅膠為200-300目硅膠，柱徑為50-100mm，徑高比為1:7-1:12。

7.根據權利要求2所述的番瀉苷A的純化方法，其特征在于：所述步驟⑸中高效液相色譜參數：C₁₈色譜柱4.6mm×250mm，5μm；流動相為乙腈B泵-1％冰醋酸A泵梯度洗脫；流速為1ml/min；檢測波長為340nm和270nm；進樣體積為15μL；柱溫為35℃。

8.如權利要求1至7任一項所述的番瀉苷A的純化方法在番瀉苷A分離純化方面中的應用。