[發(fā)明專利]基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發(fā)光檢測方法及應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011130996.X
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112255401A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設計）人: 錢榜;竇永喜;朱學亮;蒙學蓮;張學燕;趙帥陽;孫躍峰;張志東;李彥敏
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N21/76
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 王芊雨

本發(fā)明建立針對PPRV H蛋白抗體的化學發(fā)光免疫分析檢測方法，設計合成PPRV H蛋白B細胞表位作為抗原，通過優(yōu)化各步反應條件，確定臨界值且進行特異性、敏感性及重復性試驗。研究證實建立的檢測方法臨界值為S/P9.77％，敏感性為95.43％，特異性為92.23％，批內(nèi)及批間變異系數(shù)均小于10％，具有良好的敏感性、特異性和可重復性。通過對247份田間血清的平行檢測，建立的方法與國外商品化PPRV cELISA試劑盒相對符合率為94.33％，且該方法敏感性高于國外商品化PPRV cELISA試劑盒。表明建立的H蛋白抗體化學發(fā)光免疫分析方法可用于相關(guān)檢測試劑盒的開發(fā)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發(fā)光檢測方法及應用。

背景技術(shù)

小反芻獸疫(Peste des petits ruminants，PPR)屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，是由小反芻獸疫病毒(PPR virus,PPRV)引起的一種急性、熱性傳染病，具有高度的傳染性和致死性。該病毒有一個血清型4個譜系(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)(V.Balamurugan,Hemadri,Gajendragad,Singh…,2014；V.S.Balamurugan,A.；Venkatesan,G.；Yadav,V.；Bhanot,V.；Riyesh,T.；Bhanuprakash,V.；Singh,R.K,2010)，我國流行的主要為IV系。PPRV為單股負鏈RNA病毒，其基因組共編碼8個蛋白，3′端到5′端編碼的結(jié)構(gòu)蛋白分別為核衣殼蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質(zhì)蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝集素蛋白(H)和大蛋白(L)，2個非結(jié)構(gòu)蛋白(C、V)則由P基因編碼產(chǎn)生(Bailey,Banyard,Ozkul,Barrett,2005)。PPRV主要感染山羊和綿羊等小反芻類動物(Gibbs,Taylor,Lawman,Bryant,1979)，但近年來，PPRV感染宿主呈現(xiàn)多樣化，據(jù)報道駱駝(AlbayrakGür,2010；Intisar et al.,2017)、牛和水牛等大型反芻動物也可被感染(V.Balamurugan et al.,2014；Maillard et al.,2008；Zakian,Nouri,Kahroba,Mohammadian,Mokhber-Dezfouli,2016)，但通常為亞臨床感染。此外，獅子和犬(Ratta et al.,2016)、瞪羚羊、大羚羊、藍羚羊(Furley,Taylor,Obi,1987)以及野豬(Schulz,Fast,Schlottau,Hoffmann,Beer,2018)也可感染PPRV。PPRV為高度接觸性傳染病，主要通過直接接觸經(jīng)呼吸系統(tǒng)傳播，也可通過精液、胚胎和乳汁等途徑傳播。PPRV感染后臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱、肺炎、腹瀉，呼吸道和消化道黏膜炎癥等。鑒于其在全球的流行情況，PPR被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為法定報告的動物疫病(Santhamani,Singh,Njeumi,2016)，我國也將其列為一類動物傳染病。