[發明專利]基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發光檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202011130996.X
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112255401A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 錢榜;竇永喜;朱學亮;蒙學蓮;張學燕;趙帥陽;孫躍峰;張志東;李彥敏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N21/76
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王芊雨

1.基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發光檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)H蛋白B細胞抗原表位的篩選、多肽的設計

(2)H蛋白抗體化學發光檢測方法的建立

將合成的表位肽用pH值為9.6的碳酸氫鹽緩沖液稀釋后包被96孔化學發光酶標板，放于4℃過夜孵育；取出酶標板用PBST緩沖液洗板3次后甩干；每孔加入200μL 2％BSA-PBST溶液于37℃封閉1h，洗板3次后甩干；加入經稀釋后的血清，置于37℃溫箱中孵育10min；洗板3次后甩干；加入經稀釋后的酶標二抗，置于37℃溫箱中孵育10min；洗板3-5次后甩干；底物A液和B液按照1:1進行混合，每孔100μL加入酶標孔，于常溫黑暗處反應5min，之后在化學免疫分析儀器上測定發光值；

對檢測的血清樣品用陽性率(S/P)進行表示，即S/P＝(待測樣品發光值/標準陽性樣品平均發光值)×100％；S/P值大于臨界值即檢測為陽性，S/P值小于等于臨界值即為陰性。

2.根據權利要求1所述的基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發光檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)具體為：

利用IEDB、Immunomedicine Group以及BepiPred三種生物信息學軟件對H蛋白的B細胞抗原表位進行預測，共得到27條抗原表位肽并合成這些多肽，然后利用iELISA方法對其與PPRV陽性血清的反應原性進行鑒定，選取其中反應原性最好的4個B細胞表位H123、H185、H362、H487以GS作為接頭串聯，合成該肽段。

3.根據權利要求2所述的基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發光檢測方法，其特征在于：

包被抗原濃度為1.5×10^-6μg/孔；

血清稀釋度為1:100；

血清反應時間為10min；

酶標二抗反應時間為10min；

檢測的臨界值為S/P＝9.77％。

4.權利要求3所述的基于H蛋白表位合成肽的小反芻獸疫病毒抗體化學發光檢測方法在區分感染與免疫(DIVA)和免疫保護率檢測上的應用。