[發明專利]西葫蘆ZYMV病毒病分子標記與鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性的方法

在審

• 申請號: 202011130718.4
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN114381539A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 張國裕;李海真;張帆;田佳星;賈長才
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王灝增

1.一種鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性的方法，其特征在于，檢測西葫蘆的基因型鑒定或輔助鑒定西葫蘆的ZYMV病毒病抗性；所述基因型為西葫蘆基因組中ZYMV病毒病分子標記多態性的基因型，所述ZYMV病毒病分子標記多態性為西葫蘆基因組中是否缺失序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述西葫蘆基因組中ZYMV病毒病分子標記多態性的基因型為：以待測西葫蘆基因組DNA為模板以A1為因為進行PCR擴增得到PCR產物，當PCR產物均為有否缺失序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段的DNA分子時，命名為RR基因型；當PCR產物均為含有序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段的DNA分子時，命名為SS基因型；當PCR產物同時具有含有序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段的DNA分子和缺失序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段的DNA分子時，命名為RR基因型；所述基因型為SS的西葫蘆為感ZYMV病毒型西葫蘆；所述所述基因型為RR或者RS的西葫蘆為抗ZYMV病毒型西葫蘆；

所述A1為由名稱為P1和P2的單鏈DNA組成的引物對，所述P1為與SEQ ID No.1的第172位上游特異結合的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1的第196位下游特異結合的單鏈DNA。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述P1為SEQ ID No.1的第1-21位所示的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1的第297-316位反向互補的單鏈DNA。

4.西葫蘆ZYMV病毒病分子標記，為以西葫蘆的基因組DNA為模板，采用權利要求2或3所述的引物對A1進行擴增得到的DNA分子。

5.根據權利要求4所述的西葫蘆分子標記，其特征在于，所述分子標記的多態性為所述擴增得到的DNA分子是否缺失序列表中SEQ ID No.1中第172-196位所示的DNA片段。

6.鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性的引物對，為權利要求2或3中所述的A1。

7.鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性的系統，由X1和X2組成；所述X1為權利要求2或3中所述的A1，所述X2為進行PCR擴增所需的試劑和/或儀器。

8.一種西葫蘆的育種方法，其特征在于，選取權利要求2或3中所述RR或RS基因型的西葫蘆作為親本進行育種。

9.下述H1-H7中任一應用：

H1、權利要求1-3中任一所述方法或權利要求4-5任一所述西葫蘆ZYMV病毒病分子標記在鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性性狀中的應用；

H2、權利要求1-3中任一所述方法或權利要求4-5任一所述西葫蘆ZYMV病毒病分子標記在鑒定或輔助鑒定ZYMV病毒病抗性性狀穩定遺傳西葫蘆中的應用；

H3、權利要求1-3中任一所述方法或權利要求4-5任一所述西葫蘆ZYMV病毒病分子標記在西葫蘆育種中的應用；

H4、權利要求6所述引物對或權利要求7所述系統在制備鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性性狀的試劑或試劑盒中的應用；

H5、權利要求6所述引物對或權利要求7所述系統在鑒定或輔助鑒定西葫蘆ZYMV病毒病抗性性狀中的應用；

H6、權利要求6所述引物對或權利要求7所述系統在鑒定或輔助鑒定ZYMV病毒病抗性性狀穩定遺傳西葫蘆中的應用；

H7、權利要求6所述引物對或權利要求7所述系統在西葫蘆育種中的應用。

10.一種鑒定或輔助鑒定抗ZYMV病毒病性狀穩定遺傳西葫蘆的方法，為如下I或II：

I、包括如下M1)和M2)：

M1)以待測西葫蘆基因組DNA為模板，采用權利要求2所述A1進行PCR擴增得到PCR產物；

M2)檢測步驟M1)得到的PCR產物，如果所述PCR產物對應于SEQ ID No.1為一條不含有SEQ ID No.1的第172-196位所示的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗ZYMV病毒病性狀穩定遺傳西葫蘆；

II、包括如下N1)和N2)：

N1)以待測西葫蘆基因組DNA為模板，采用權利要求3所述A1進行PCR擴增得到PCR產物；

N2)如下N21)或N22)：

N21)檢測步驟N1)得到的PCR產物的大小，如果所述PCR產物含有291bp的DNA片段、不含316bp的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗ZYMV病毒病性狀穩定遺傳西葫蘆；

N22)檢測步驟N1)得到的PCR產物的序列，如果所述PCR產物含有SEQ ID No.2所示的DNA片段、不含SEQ ID No.1所示的的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗ZYMV病毒病性狀穩定遺傳西葫蘆。