[發明專利]AroG的突變體及其在產氨基酸基因工程菌中的應用

有效

• 申請號: 202011129162.7
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112266892B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 張大偉;丁冬芹;柏丹陽;朱亞如
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽石文

1.一種產色氨酸的基因工程細菌的制備方法，其特征在于，是通過定點突變將出發細菌中3-脫氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合酶AroG進行突變，以解除苯丙氨酸對AroG的抑制作用，其是通過構建含有編碼所述突變的aroG基因的表達載體導入出發細菌中，或者通過基因定點突變將出發細菌中的AroG編碼基因進行所述突變；同時，將出發細菌中的調控因子RpoS進行失活，還通過基因工程方法使所述出發細菌過表達ppsA基因、敲除trpR基因和敲除色氨酸酶tnaA基因，最終得到產色氨酸的基因工程細菌；所述3-脫氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合酶AroG的突變是指將AroG的第211位氨基酸殘基由S突變成F；所述對調控因子RpoS進行失活，其是通過基因編輯方法實現，其是將其中氨基酸序列第33位進行無義突變；

其中，aroG基因的GenBank登錄號為 945605, rpoS基因的GenBank登錄號為 947210,ppsA基因的GenBank登錄號為 946209, trpR基因的GenBank登錄號為948917, tnaA基因的GenBank登錄號為948221；

所述基因工程細菌的出發細菌是大腸桿菌KW。

2.由權利要求1所述的制備方法獲得的基因工程細菌。

3.一種利用如權利要求2所述的基因工程細菌生產色氨酸的方法。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，通過對所述基因工程細菌進行發酵，然后收集色氨酸。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，其中將所述基因工程細菌經過38-42h發酵培養后，從發酵液上清中收集色氨酸。