[發明專利]一種毛囊外根鞘混懸液及其制備方法

在審

• 申請號: 202011128816.4
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112280732A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 蘭長貴;童學婭;常心通;胡海彥;劉愛美;林永祥;喻明江;馬晶;田文傲
• 申請（專利權）人: 成都博潤白癜風醫院有限公司;核工業四一六醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/36;A61P17/00
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 肖芳

本發明公開了一種毛囊外根鞘混懸液的制備方法，包括以下步驟：提取毛囊單位并進行孵育；刮取毛囊單位上的毛囊外根鞘組織，過濾，得過濾物1和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，得沉淀并對其吹打重懸，得混懸液1；將過濾物1加入含有胰蛋白酶的EDTA溶液中消化，然后向其中加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基，過濾，得過濾物2和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，收集沉淀并吹打重懸，得混懸液2；取過濾物2，將其重復上述操作，得混懸液3；將混懸液1、2和3混合后離心，得細胞沉淀并重懸，過濾得濾液，離心，收集沉淀，將沉淀重懸，制得。該方法可有效解決現有的黑色素細胞存在的培養時間長，培養所用溶液安全性的問題。

技術領域

本發明涉及毛囊外根鞘混懸液技術領域，具體涉及一種毛囊外根鞘混懸液及其制備方法。

背景技術

白癜風是一種獲得性黑素細胞缺失引起的色素性皮膚病，其臨床的典型特征為皮膚出現單一或多處的白斑。我國的白癜風發病率約為0.09％-2.7％，近年來發病率呈上升趨勢。白癜風雖然不危及患者生命，但是病情的遷延不愈、反復發作給患者造成了巨大的心理負擔，阻礙患者的人際交往，甚至造成心理疾病。

白癜風的病因尚不明確，一般認為病因與以下幾個方面有關：1、遺傳易感性，有一定的家族遺傳聚集現象。2、自身免疫，常伴隨著其他自身免疫性疾病。3、黑素細胞自毀，在白癜風患者的皮損區出現了不同情況的黑素細胞缺失。4、環境因素，長期接觸含有酚類的物質可導致白癜風發病率增加。

白癜風的治療方法并不完善，在該病進展期只能單純依靠藥物、光療等方法進行治療，而在穩定期才可以適當使用外科手段，在目前最常用的外科治療方式是自體表皮移植手術，雖然表皮移植能夠讓皮損區復色，但是，其治療面積完全受供皮區大小限制，對存在大面積皮損的患者只能通過多次表皮移植才能實現，這對患者的身心以及經濟都造成了巨大的負擔。

目前，也有通過自體黑色素細胞進行移植治療，但是，現有技術中的黑色素細胞獲取后需要進行培養后才能進行使用，培養過程中需要使用大量的生長因子、血清等物質，由于這些物質用于人體，會存在較大的安全隱患，而且，黑色素細胞培養的時間較長，導致治療的周期延長。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供了一種毛囊外根鞘混合液的制備方法，該方法可有效解決現有的黑色素細胞存在的培養時間長，培養所用溶液安全性的問題。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種毛囊外根鞘混懸液的制備方法，包括以下步驟：

(1)提取患者頭部毛囊單位；

(2)將步驟(1)中獲取的毛囊單位用含有抗菌素的高糖DMEM培養基進行清洗；

(3)將步驟(2)中清洗后的毛囊單位放入含Ⅱ型膠原酶的高糖DMEM培養基中進行孵育；

(4)刮取步驟(3)中孵育后的毛囊單位上的毛囊外根鞘組織，過濾，得過濾物1和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，收集沉淀，向沉淀中加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基后吹打重懸，得混懸液1；

(5)將步驟(4)中過濾物1加入含有胰蛋白酶的EDTA溶液中進行消化，然后向其中加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基稀釋胰蛋白酶，過濾，得過濾物2和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，收集沉淀，向沉淀加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基后吹打重懸，得混懸液2；

(6)取步驟(5)中的過濾物2，將其重復步驟(5)中的操作，得混懸液3；

(7)將步驟(4)、步驟(5)和步驟(6)中的混懸液1、2和3混合后以2000r/min的轉速離心，得細胞沉淀，將細胞沉淀重懸，然后用細胞篩過濾得濾液，將濾液繼續以2000r/min的轉速離心5min，收集沉淀，將沉淀用含有抗菌素的高糖DMEM培養基重懸，制得。