[發明專利]一種毛囊外根鞘混懸液及其制備方法在審
| 申請號： | 202011128816.4 | 申請日： | 2020-10-21 |
| 公開（公告）號： | CN112280732A | 公開（公告）日： | 2021-01-29 |
| 發明（設計）人： | 蘭長貴;童學婭;常心通;胡海彥;劉愛美;林永祥;喻明江;馬晶;田文傲 | 申請（專利權）人： | 成都博潤白癜風醫院有限公司;核工業四一六醫院 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;A61K35/36;A61P17/00 |
| 代理公司： | 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 肖芳 |
| 地址： | 610041 四川*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 毛囊 外根鞘混懸液 及其 制備 方法 | ||
1.一種毛囊外根鞘混懸液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取患者頭部毛囊單位；
(2)將步驟(1)中獲取的毛囊單位用含有抗菌素的高糖DMEM培養基進行清洗；
(3)將步驟(2)中清洗后的毛囊單位放入含Ⅱ型膠原酶的高糖DMEM培養基中進行孵育；
(4)刮取步驟(3)中孵育后的毛囊單位上的毛囊外根鞘組織，過濾，得過濾物1和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，收集沉淀，向沉淀中加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基后吹打重懸，得混懸液1；
(5)將步驟(4)中過濾物1加入含有胰蛋白酶的EDTA溶液中進行消化，然后向其中加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基稀釋胰蛋白酶，過濾，得過濾物2和細胞混懸液，將細胞混懸液離心，收集沉淀，向沉淀加入含有抗菌素的高糖DMEM培養基后吹打重懸，得混懸液2；
(6)取步驟(5)中的過濾物2，將其重復步驟(5)中的操作，得混懸液3；
(7)將步驟(4)、步驟(5)和步驟(6)中的混懸液1、2和3混合后離心，得細胞沉淀，將細胞沉淀重懸，然后用細胞篩過濾得濾液，將濾液繼續以2000r/min的轉速離心5min，收集沉淀，將沉淀用含有抗菌素的高糖DMEM培養基重懸，制得。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中將毛囊單位于37℃條件下在CO2培養箱中孵育1h。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述高糖DMEM培養基中的Ⅱ型膠原酶的質量體積濃度為1mg/ml。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)和步驟(5)中分別將細胞懸液以3000r/min的轉速離心5min。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中的過濾物1于37℃條件下在CO2培養箱中消化10min。
6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述EDTA溶液中胰蛋白酶的質量體積濃度為0.25％。
7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)、步驟(4)、步驟(5)和步驟(7)中所述高糖DMEM中抗菌素為青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混懸液，其中青霉素的濃度為80-120U/ml，鏈霉素的濃度為0.05-0.15mg/ml，兩性霉素的濃度為0.2-0.3ug/ml。
8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(7)中所述細胞篩的孔徑為70um。
9.采用權利要求1-8中任一方法制備得到毛囊外根鞘混懸液。
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